文档介绍：:..实验三PCR扩增姓名:李宗翰专业:环境工程学号:1432999同组人姓名:刘雪飞一、实验目的复****PCR扩增的原理,熟悉PCR的操作流程。二、实验原理PCR,即聚合酶链式反应,是一项在体外、短时间内大量扩增特定的DN***段的分子生物学技术。以单链DNA为模板、4种dNTP为底物,在模板歹末端有引物存在的情况下,用酶进行互补链的延伸。多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。PCR包括三个过程:(1)、变性:目的双链DN***段在94°C下解链;(2)、退火:两种寡核昔酸引物在适当温度(50-60°C)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3)、延伸:DNA模板一引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性■退火•延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2〜4分钟,2-3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。三、实验仪器及材料PCR扩增仪,微量移液器(0」〜、〜10PL、10〜100UL三种),Tip头,,,TaqDNA聚合酶,dNTP,buffer,引物(341FGC和534r),16S全长DNA样本。四、实验步骤1、 >10uLdNTP、5uL341FGC引物、,,每支管加入24uL混合液。2、向第1〜8支薄壁管分别加入1UL样品模板,第9支管加入1UL无菌水做阴性对照。在薄壁管的盖子上写上组号及样甜编号。3、将9支薄壁管放入PCR扩增仪中,设置好扩增条件:94°C3min;94°C30s;55°C30s;72°C30s;72°C5min;15°C。循环次数30〜40。设置好后启动扩增仪,开始扩增。4、将扩增的好的样品按下述步骤进行电泳实验:(1)、,放置微波炉中加热2min左右,至混合液透明,取出室温下冷却。将混合液倒入FR-180E制胶器的槽中,插入孔刷,注意不要有气泡。冷却一段时间,等胶凝固。(2)、取10PLLoadingBuffer染液,在铺平的塑料手套上均匀分成9份,再取4ULPCR产物与染液混匀。将lOuL移液器调至6-7PL,依次吸取上述混合液滴,分别加入到1-9号胶孔中,第10号胶孔中加入4口L的DL2000TMDNAMaekero(3)、,通100V电压。(4)、电泳半小时左右,可明显看出染液移动。将胶至于分析仪器内,在紫外灯照射下,得到电泳图并扌白照。五、实验结果与讨论1、此次实验结果是什么?(请附图)所得到的实验结果该如何解释?答:此次实验结果如下图所示。图中,号为待测样品,9号为阴性对照,10号为DNAMarkero从电泳结果可以看出,3・6号样品对应Marker的250bp左右处有明显的亮带,说明3-6号样品的PCR扩张很好。2号