鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究.doc

文档介绍：江西农业大学学报 2011,33( 6) : 1164 - 1170
Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis

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鸡胚小肠上皮细胞的分离
及原代培养研究
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( 1. 江西农业大学/江西省高等学校动物营养与饲料重点实验室,江西南昌 330045; 2. 中国农业科学院哈尔滨兽
医研究所,黑龙江哈尔滨 150001)
摘要:取 18 日龄的 SPF 鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶 I 和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外
培养小肠上皮细胞。结果表明: 组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低; 胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞
贴壁和生长能力较弱; 胶原酶Ⅰ单独消化 50 min 或嗜热菌蛋白酶单独消化 110 min 以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白
酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块,经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,可获得较纯的
上皮细胞。分离的细胞接种培养 12 ~ 24 h 贴壁,48 ~ 72 h 细胞团中的细胞向四周蔓延,形成一群群的细胞集
落,6 ~ 7 d 细胞汇合成片,成“铺路石样”,细胞多呈扁平多角状,椭圆状,单层生长,边界清晰,互不重叠。经形
态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞。
关键词:鸡小肠上皮细胞; 分离; 原代培养; 鸡胚
中图分类号:S831. 1
文献标志码:A
文章编号:1000 - 2286( 2011) 06 - 1164 - 07
Isolation and Primary Culture of
CHicken Embryo Small Intestinal EpitHelial Cells
HONG Zhi-min1 ,JIA Yong-jie1 ,QU Ming-ren1 ,LI Guan-hong1* ,LIU Si-guo2*
( 1. Key Laboratory of Jiangxi University for Animal Nutrition and Feed / Jiangxi Agricultural University,
Nanchang 330045,China; 2. Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sci-
ences,Harbin 150001,China)
Abstract: Eighteenday-old chicken embryos were used to investigate the method for isolation and primary
culture of the chicken intestinal epithelial cells. Primary small intestinal epithelial cells from chicken embryo
were isolated by means of tissue culture,try