文档介绍：摘要耐琀期原虫确能诱导产生保护性抗体,这类抗体在体外能完全抑制疟原虫生长,许多疟疾目前仍然是严重威胁人类健康的寄生虫病,由于疟原虫抗药性以及蚊媒抗杀虫剂的产生和扩散,使疟疾防治面幅严重困难。因此,研制有效的疟疾疫苗已成为疟疾防治重要潜在的替代途径。研制疟疾红内期疫苗对降低疟疾的发病率和死亡率具有重要作用。针对红内期原虫免疫保护机制的研究,早期工作主要集中在体液免疫的作用。事实上红内动物试验结果也表明抗体在清除红内期原虫感染中发挥重要作用。由于红细胞表面缺乏肿樱虼讼赴拘訲淋巴细胞院炷谄谠娌荒芊⒒有в作用。但实验表明,在赴毕莸男∈竽P椭薪忻庖吖セ鞲腥臼匝椋峁示免疫小鼠能产生对疟原虫攻击感染的免疫保护效力。尽管这种免疫力不能完全清除攻击感染的疟原虫,但可控制原虫密度在很低水平。显然,该免疫保护效力是由细胞免疫介导的。此外,旷赴堂庖咝∈笠材芏耘痹婀セ鞲腥静生保护作用。这些结果表明在疟原虫的红内期免疫机制中,体液免疫和细胞介导的细胞免疫均发挥重要的作用。近年来,许多红内期疫苗候选抗原陆续得到鉴定,但这些抗原中绝大多数是针对保护性体液免疫的抗原。最近緊冉泻炷谄谠婵乖凶榉化并建立各组分的赴废担ü堂庖吆凸セ鞲腥臼匝槿范司哂斜护保护作用的赴废担⒊醪郊ㄅ痹娲位凄堰室荒襦堰室换凄堰室涣姿岷糖转移酶为这种保护性赴陌锌乖青堰屎塑账岵咕群铣赏揪吨械囊个酶,可催化姿岷颂墙沽姿豚堰史从ι舌堰屎塑账帷T诓溉动物体内,除有补救合成途径外,还有嘌呤核苷酸从头合成途径,但在疟原虫仅有补救合成途径,只能利用补救途径合成生命所必需的核苷酸,故而对于疟原虫便显得尤为重要,成为广泛关注的抗疟疾药物的靶标。因此有必要制备重组蛋白建立特异赴废担越徊饺范ㄆ湎赴庖叩拿庖弑;ぷ饔茫在此基础上鉴定其保护性赴砦弧本实验室利用毕氏酵母系统表达并纯化了恶性疟原虫重组蛋白,聇第二军医大学硕士学位论文
白与完全弗氏佐剂榛⒚庖連删∈螅诘谒暮偷诹芤圆煌耆胞品系。用重组Ⅺ,蛋白免疫/∈笏ú嗌现ā⑺愕婧透鼓つ冢在培养物中加入浓度为靴痬腍乖碳ぃ嘌天私锥闻嘌刺激期4撕螅恍孪释耆嘌尤胧柿克茄赴加男Ⅺ,特异赴废怠细胞/只、槲磍狿允酒浞肿恿吭嘉肜砺鄯肿恿接近。检测该重组蛋白可与疫区患者血清反应。本研究在此基础上,将重组蛋弗氏佐剂榛鞍准忧棵庖吡酱危⑸枇⑿∨QG灏椎鞍和对照组,在末次免疫天后用约氏疟原虫进行攻击感染,自感染次日起,每日制备薄血膜镜检原虫率。结果显示对照组小鼠在攻击感染后天全部死亡,而免疫组%小鼠能存活并痊愈,原虫密度峰值低于对照组。结果显示,三次免疫血清抗体滴度次第升高,至末次免疫时可达陨稀为研究抗原的细胞免疫作用,我们建立了特异性的旌笕∫赶隆⒏构晒怠㈦傥蚜馨徒岷推⒃嘀票傅ハ赴航刑逋馀嘌鼠境,但不加抗原,继续培养此阶段培养称间歇期天后再更换培养基,并加入抗原、饲养细胞和小鼠嘌天。,根据细胞增殖情况,分瓶传代。同时以小牛血清白蛋白作为对照,建立匾煨缘腡淋巴细胞系。采用【】一羧敕ḿ觳飧鱐细胞系的淋巴细胞增殖情况。结果显示在的刺激下,淋巴细胞出现了明显的增殖,滴,.,明显高于抗原致敏的小鼠脾脏及淋巴结细胞的增殖为砻骶碳ぃ湫束ぱ罚殉晒为表明特异赴拿庖弑;ぷ饔茫颐强U沽斯堂庖吲痹攻击实验。实验分为三组,分别为特异性的馨拖赴椤特异的馨拖赴椤组,每组宦闶蟆>簿猜鲎⑸銽细胞,剂量为’弧后,静脉注射际吓痹娓腥镜暮煜胞进行攻击感染,次日起每日制备薄血膜镜检原虫率。三组原虫率比较显示对照组原虫率上升急速,楹蚉组原虫率峰值分别出现在感染后第和第天,原虫率分别为.%和.%,而组原虫率较为平缓,峰值出现在感染后第天,原虫率为.%。比较三组小鼠生存时间显示,榈第二军医大学硕士学位论文
偷、号小鼠分别于死于感染后第偷天,第判∈笤诟腥竞蟮天死亡;樾∈笤诟腥竞蟮天全部死亡,而组小鼠生存时间明显延长,自感染后第天开始出现死亡,至第天时全部死亡。结果表明,特异赴芸刂婆痹婷芏仍诮系偷乃剑乇鹗窃诠堂庖吆罂始阶段作用明显,延长免疫小鼠的生存时间。综上所述,本研究采用毕氏酵母表达系统产生的恶性疟原虫重组蛋白,建立了抗原特异的赴废担ü堂庖呤笛椋峁砻髁薍特异赴栽际吓痹娴墓セ鞲腥揪哂忻飨缘拿庖弑;ぷ饔谩4送猓弥刈免疫也能产生部分免疫保护作用。这些结果提示∧苡盏疾保护性赴庖撸馕=窈蠹ㄅ痹鍴乖;ば訲细胞表位提供了实验依据。这种保护性赴坏┘ǎ颐墙洳羧氲奖臼夜菇ǖ腜。疫苗抗原中,预期会进一步提高疟疾疫苗的免疫保护效果和广谱性。关键词:;,:细胞免疫;巴细胞系第二军医大学硕士学位论文
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