文档介绍：异丙黜．甀半，魄苷烈婚蝴渤中英文缩略词对照表№鼬沾英文全称碱基对二氨基联苯***酶联免疫吸附试验辣根过氧化物酶吟磷酸核塘转移酶千道尔顿讳***—胚酼十二烷基磺酸钠．聚丙乙二***四乙酸单克隆抗体丌放阅读框英文简写中文全称腺苷激酶过硫酸***ゲ笵次黄嘌呤．黄嘌呤．鸟嘌干碱基对培养基分子量***纤维紊膜糖苷烯酰***电泳卡那霉素邻苯二***ぁぁ一安徽医科人学硕郝哿甈!狣—甮—
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勰日期：——试，日期：枷。籪了学位论文独创·学位论文使用授权声明成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解安徽医科大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究学位论文作者签名导师签名日期
弓形虫次黄嘌呤．黄嘌呤．鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和腺苷激酶基因的克隆、表达及多抗血清的制备中文摘要硕士研究生沈继龙教授安徽医科大学病原生物学教研室；安徽医科大学人兽共患病研究所教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室不找娇拼笱目的：克隆弓形虫株次黄嘌呤．黄嘌呤氆堰柿姿岷颂亲R泼腺苷激酶基因，构建原核表达载体／和／，表达和重组蛋白，利用此重组蛋白免疫新西兰白兔制各多抗血清。方法：复苏本室液氮保种的弓形虫株速殖子，腹腔接种／∈蟆ＷV槿「顾占⒋炕纬嬷晁僦匙樱崛∽躌，在设计合成的引物中引入蚗盖形坏恪Ｓτ肦┰龉纬鍴珹因片段，目的基因插入克隆载体康幕駻迦肟寺≡体—崛≈刈橹柿＃珺和双酶切获得目的基因，插入原核表达质粒中，重组子双酶切、筒庑蚣ǎ;蟪Ω司鶨．⒁訧盏急泶铩Ｇ缀筒阄龇ù炕刈榈鞍卓乖琒验证表达量和免疫活性，改良的悸硭沽晾法测定纯化蛂蛋白浓度。免疫新西兰白，收集多抗血清，舛多抗滴度，庖呋钚浴＝峁篟庸纬鍾闞中扩增出腍腁勘昊蚱巍３晒Φ亟淇寺∪李霞导师合肥安徽瓯科大学顾郝畚
—粜钥刂蒲G迨侗穑瑀能够被约梁现械腡．粜钥刂蒲。／和／经蚗盖校竦糜目标基因大小相一致的基因片段，测序结果与榷訦葱ィ珹葱％。含／和／的宿主菌甤璉盏己蟾咝П泶锷鲜个重组蛋白，经亲和层析法纯化获得了高纯度的蛂蛋白。甈觳馄浞肿恿浚簉为．，哂敫髯栽て诜肿恿看笮∠喾显示：芄槐还纬婊颊哐G逯械腎抗体和约梁现械清识别，获得了两种纯化的具有特异免疫反应性的重组蛋白。蛂分别免疫新西兰白兔，获得味任：蚻：街侄嗉劭寡G澹琖显示，每种多价血清不仅能和其对应的重组蛋白而且和虫体内相应蛋白发生特异性免疫反应。结论：成功地从弓形虫株基因组中获取了和基因，构建了／和／重组质粒，并获得了高效表达；重组蛋白免疫新西白兔获得了两种高效价多克隆抗体。本研究为对弓形虫嘌呤核酸代谢及基因沉默的研究，以及研发标准化弓形虫免疫血清诊断试剂打下了基础。关键词：弓形虫；次黄嘌呤．黄嘌呤．鸟嘌呤磷酸核糖转移酶；腺苷激酶；．克隆：表达：免疫；多克隆抗体立徽医科大学硕郝凼
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弓形虫次黄嘌呤．黄嘌呤．鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和腺苷激酶基因的克隆、表达及多抗血清的制备前言刚地弓形虫且恢肿ㄐ园诩纳妫彩腔嵝灾虏≡虫，可感染多种哺乳动和几乎任何有核细胞【俊Ｈ颂寤竦眯愿腥竟纬婧笸ǔＮ廾显的临床表现，但对免疫力低下的病人如疉颊撸邮芷鞴僖浦不蛘咧琢患者的长期化疗，则可导致体内隐性感染的活化，引起严重的弓形虫病，如发热、淋巴结肿大、弓形虫脑炎和脑膜脑炎，视网膜脉络膜炎以及全身播散性弓形虫病等。弓形虫是中枢神经系统最为常见的机会性感染病原体，弓形虫脑炎是艾滋病患者最为常见的脑内损伤，也是最常见致死病因之一【俊８腥竟纬娴陌滩』颊除可引起弓形虫脑炎外，还可引起肺炎、心肌炎【俊Ｏ忍煨怨纬娓腥鞠蹈腥灸柑通过胎盘传染至胎儿，予代受累严重程度一般与母体妊娠期感染弓形虫的时间有关，从无典型表现到死胎、流产、新生儿脑水肿、脑钙化以及其它出生缺陷。部分新生儿的先天感染可致儿童时期才有临床表现，精神发育迟缓、痴呆或其它神经精神症状，甚至严重的大脑损伤Ｏ忍煨怨纬娌≡谛律械姆⒉÷试嘉／，是影响优生优育的严重感染性疾病。目前，我国已将先天性弓形体病列入出生缺陷干预工程【俊＞荼ǖ既蛟加谌顺使纬嫜G蹇固逖粜浴】。欧洲是弓形虫感染的高发区，部分地区弓形虫血清抗体阳性率超过％。美国约有％的人口感染弓形虫【俊８牡鞑