文档介绍：两株吡啶降解菌的分离与鉴定
王基成1,张秀霞2*,房苗苗2,吴伟林2,赵朝成2,鲁军1
1. 华东理工大学资源与环境工程学院,上海 200237;2. 中国石油大学(华东)化学化工学院环境科学与工程系,山东东营 257061
摘要:为了研究石油污染土壤中含氮杂环化合物的降解情况,该研究选择吡啶作为目标污染物,采用选择性富集培养的方法,从45份石油污染土壤样品中,分离得到260株降解吡啶污染物的高效降解菌株,选择降解效率最高的2株吡啶降解菌命名为菌株4-11和2-13,进行种属鉴定、细菌的生长情况和吡啶降解性能的考察。实验证明,60 h菌株4-11和2-13对质量浓度为1000 mg·L-%%。通过形态学、生理生化鉴定和16S rDNA序列比对分析,确定菌株4-11属于产硫酸杆菌(Thiobacillus)与Thiobacillus intermediu 同源性最高, %,菌株2-13属屈挠杆菌(Flexibacter)与 Flexibacter giganteus同源性最高, %。
关键词:吡啶;降解菌株;筛选;鉴定
中图分类号:X172 文献标识码:A 文章编号:1672-2175(2008)01-0117-05
含氮杂环化合物广泛应用于石油、食品和医药工业。它们大都是有毒且难降解的有机物,不易受代谢过程的破坏,属于污染面广的难降解有机物,对生态系统和人类健康会产生潜在的长期危害[1-4]。杂环类化合物是具有较大威胁的一类化合物,比对应的非杂环化合物的毒性高[5]。
吡啶是典型的含氮杂环化合物,广泛用于化工、医药工业以及农药生产等行业[5],具有毒性大、致畸性、致癌性强和难生物降解等特点。由于吡啶的水溶性和扩散性都较好,已成为土壤和废水中常见的污染物,生物修复是解决该类问题的有效方法[5-7,9]。利用从环境中筛选的降解微生物能够有效去除环境中杂环和苯环类等污染物质[8-11]。
在石油勘探、开采、运输及储存作业过程中产生的落地原油及含油污水会对土壤造成污染。近年来,我国的石油污染土壤问题在不断恶化,并因此导致了其他的环境问题,致使生物品质下降,进而危害人类健康[1010]。
国内外已有关于废水中吡啶的生物降解的研究[5-6,13]。对于石油污染土壤中的吡啶,单纯依靠土著菌群进行降解处理,短时间内很难见效,所以对石油污染土壤中吡啶等含氮杂环化合物的生物降解研究鲜有报道。胜利油田原油中碱氮质量分数为91~2580 µg/g,占总氮的28%~57%,并随馏分加重而增加;而重馏分在自然环境中难以生物降解[14]。本研究希望通过对典型的石油污染土壤进行高效吡啶降解菌的筛选分离及鉴定,探寻高效降解菌的种属关系,为吡啶污染土壤的生物修复提供参考。
1 试剂与方法
主要设备与试剂
分光光度计,UV-2100(上海第三分析仪器厂),721(上海第三分析仪器厂);
振荡培养箱,HZQ-X100(哈尔滨东联电子技术开发公司);
生化培养箱,SPX-250型(上海跃进医疗器械厂);
吡啶(Pyridine),医药集团上海化学试剂公司出品,含量≥%;
吡啶降解菌筛选方法
菌株筛选采用富集培养的方法。将采集到的土样取一勺加入50 mL无菌水,于25 ℃恒温