文档介绍：CRD-BP RNA表达与结直肠癌临床特征相关性分析
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:金晓菲,尹莉,陈官民,王小娟
【摘要】:为了解结直肠癌患者外周血中不稳定编码区结合蛋白(CRD-BP)RNA的表达与患者临床特征的相关性, 应用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应方法检测32例结直肠癌患者和35例对照组人群外周血中CRD-BP RNA的表达。结果结直肠癌组32个样本中有10个样本中检测到CRD-BP RNA表达,%,对照组35个样本中均未检测到CRD-BP RNA表达,两组间阳性表达率差异有统计学意义(P<);实验组中CRD-BP RNA的表达与临床分期及有无淋巴结转移密切相关(P<)。结直肠癌患者外周血中CRD-BP RNA表达可能与有无淋巴结转移、临床分期相关。
【关键词】 CRD-BP RNA;外周血;直肠癌
结直肠癌在全球发病率居第三位、死亡率居第4位[1]。近年来不稳定编码区结合蛋白(Coding Region instability Determinant-Binding Protein,CRD-BP)成为肿瘤学研究的热点。已有研究表明CRD-BP在结直肠癌等多种肿瘤中表达,研究其表达与直肠癌临床特征相关性可以为临床诊断、治疗、判断结直肠癌预后提供帮助。
1 材料与方法
对象和分组
结直肠癌患者32例(实验组),男18 例,女 14例,年龄36~83 岁,平均 62岁。肿瘤病理类型:根据Dukes分期标准进行临床分期:DukesA期7例、DukesB期13例、DukesC期10例、DukesD期2例。分化程度:高分化腺癌9例、中分化腺癌16例、低分化腺7例。术后确定肿块直径≤5cm 18例、>5cm 14例。术后确定有淋巴结转移12例、无淋巴结转移20例。所有标本均来源于宁夏医科大学附属医院,。
对照组共35例, 均选取宁夏医科大学附属医院2006年1月-2006年4月门诊就诊者,其中健康体检者20例,经肠镜活检确诊良性肠道疾病者15例。男18例,女17例,年龄分布22~56岁,中位年龄37岁。
引物、探针的设计与合成
CRD-BP RNA引物参照Ross资料设计[2],采用计算机软件辅助设计,根据引物的设计原则,设计扩增的CRD-BP RNA引物序列为:外引物:上游引物:5’-AT-3’(20bp),下游引物:5’-AG-3’(21bp);内引物:上游引物:5’-GAA ATGA-3’(20bp),下游引物:5’-AGGT TCA-3’(21bp)。引物由上海博亚生物技术有限公司合成。按照荧光定量PCR 探针设计要求,设计荧光定量PCR扩增HCV的探针序列为:5’-T GCA GTC T C TGG C-TAMRA-3’(25bp), 其中5’标记的荧光发光基团是6-羧基荧光素,3’标记的荧光淬灭基团为四甲基罗达明,探针的合成及5’端标记在中山大学达安基因诊断中心实验室PE394仪上合成,随后进行3’端标记及封闭。探针的纯化采用15%聚丙烯凝胶电泳后割胶分离纯化,纯化后的探针测定其OD值,计算其含量,置-20℃备用。
RNA