ellman测巯基.doc

文档介绍：Ellman'sReagent,埃尔曼的试剂,5,5'二硫代双-(二硝基苯甲酸),5克MolecularWeight::#:69-78-3CAS号:69-78-3使用半胱氨酸标准精确量化巯基程序材料的制备·1反应缓冲液:,,含有1mM的EDTA2半胱氨酸标准品,:配成一定浓度梯度3Ellman试剂溶液:(.=)(Blank)2取若干试管,。3在各试管中加入250μL各浓度的标准工作液或待测物溶液注:对于未知的样品需要稀释,以便使其浓度在标准曲线的工作范围之内(-)。4在室温混合和反应15分钟。5在412nm处测量吸光度。,测定待测样品由标准曲线计算SH含量摩尔吸光系数的程序精确量化的巯基的材料的制备1反应缓冲液:,,含有1mM的EDTA2Ellman试剂溶液:,。,,空白添加250μL反应缓冲液Note:,。。(14,150)paredto该国能在412nm的合成,。BecausethestoichiometryofproteinthioltoTNBformed由于蛋白质的巯基,以国能形成化学计量is1:1,:1,国能形成可以用来评估硫醇数目。Intheabsenceofdenaturants,essiblethiolswillreact,whereas在变性剂的情况下,唯一能够找到的硫醇的反应,。Reductionoftheproteinfollowedbytreatment经处理后减少的蛋白质withchaotropesandDTNBcanyieldthetotalnumberofcysteines