文档介绍：首先制作半胱氨酸标准曲线,再用紫外分光光度法测定样品吸光度,计算出疏基含量, 最终得出修饰率。 1、制作标准曲线: 缓冲液的配制:称取 2 PO 4与 2 HPO 4于 500ml 容量瓶中,用超纯水溶解,加入 的 EDTA ( 乙二胺四乙酸) ,使其完全溶解,定容成 500ml 。 Ellman 试剂的配制:称取 4mgDTNB 溶解在 1ml 缓冲液中。取7 只试管,分别在每只试管内加入 50μL Ellman 试剂与 磷酸钠缓冲溶液,混匀后,再在各试管内加入 50μL 标准溶液,混合均匀,在室温放置 15min ,以溶液 G 为空白, 于波长 412nm 处测定半胱氨酸标准液的吸光度值(A) ,如表 9 所示: 制作标准曲线如图 10 所示。得标准曲线方程为 y=- ,R 2 =09994 ,满足要求。 2、测量半胱氨酸透明质酸结合物的修饰率: 配制样品溶液:称取 半胱氨酸透明质酸结合物(含 伯醇羟基)用缓冲液溶解并定容至 5ml ; 配制空白对照溶液:称取 透明质酸(含 伯醇羟基)用缓冲液溶解并定容至 5ml ; 取2 只试管,分别在每支试管内加入 50μL Ellman 试剂与 磷酸钠缓冲溶液,混匀后,再在各试管内加入 50μL 待测样品,混合均匀,在室温放置 15min ,以透明质酸溶液做空白,于波长 412nm 处测定待测样品的吸光度值(A) ,如表 10 所示: 利用标准曲线和测得的样品溶液吸光度,计算样品中巯基的含量。带入标准曲线计算: =- , 得出修饰率为 % ( 巯基数相对于透明质酸的双糖单位数)。