文档介绍：Ellman's Reagent ,埃尔曼的试剂,5,5'二硫代双- (二硝基苯甲酸),5克
Molecular Weight: 分子量:
CAS #: 69-78-3 CAS号:69-78-3
使用半胱氨酸标准精确量化巯基程序
材料的制备·
1 反应缓冲液:,pH ,含有1 mM的EDTA
2 半胱氨酸标准品, :配成一定浓度梯度
3 Ellman试剂溶液:1mL反应缓冲液4毫克溶解DTNB
程序
配制一定浓度的半胱氨酸工作液
Standard
Volume of Reaction Buffer
Amount of Cysteine
(. = )
Final Concentration
A
100 ml
mg
mM
B
5 ml
25 ml of Standard A
mM
C
10 ml
20 ml of Standard A
mM
D
15 ml
15 ml of Standard A
mM
E
20 ml
10 ml of Standard A
mM
F
25 ml
5 ml of Standard A
mM
G
30 ml
0 ml
mM (Blank)
2 取若干试管,。
3在各试管中加入250μL各浓度的标准工作液或待测物溶液
注:对于未知的样品需要稀释,以便使其浓度在标准曲线的工作范围之内(-)。
4在室温混合和反应15分钟。
5 在412 nm处测量吸光度。
,测定待测样品由标准曲线计算SH含量
摩尔吸光系数的程序精确量化的巯基的
材料的制备
1 反应缓冲液:,pH ,含有1 mM的EDTA
2 Ellman试剂溶液:1mL反应缓冲液4毫克溶解DTNB
,。
,,空白添加250μL反应缓冲液
Note : ,浓度太高将会导致误差变大
。
。
(14,150)计算巯基含量
The TNB dianion has a relatively intense absorbance at pared to该国能在412nm的合成,有一个相对比较激烈的吸光度
both 。 Because the stoichiometry of protein thiol to TNB formed由于蛋白质的巯基,以国能形成化学计量
is 1:1, TNB formation can be used to assess the number of thiols :1,国能形成可