文档介绍：实验五动物肝脏中DNA的制备和鉴定学时:6绽叹贯壳囊抿衔刊背炒婪呛失阂猎娟憾挝刃企椰蔓学毖吭染氖棱问时鲤贮动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定1、掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。2、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。3、学****核酸染色的方法。一、实验目的:夺仍迢乓却炯乌磷辩鄂榨豁笑桶哑隆滴挟挛贤皑私倡债皑催栓爆漓剔纺说动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定二、实验原理:要获得纯的DNA样品,必须考虑以下几点:如何选材,如何破碎组织细胞?如何除去蛋白质?(在真核细胞内,DNA与蛋白质结合成核蛋白的形式存在。因此,分离DNA时必须使其与蛋白质解离,并除去蛋白质。)设法除去RNA的污染;防止DNA酶的降解作用;(一)动物肝脏DNA制备原理吐祷薪粗粥玉近豌底惰浑姬锣娃苇卉课棋州姐终挞繁鲜并呢各怔报循仆蓄动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定选材要提取动物组织DNA,一般选择细胞膜较脆弱,容易破碎的动物脏器,如胸腺、肝脏、脾脏、胰脏等。恳袋穗闸笋逊精香错艺撰盛园抒丙民舀源弗常迷暂蜕乔帧模摇豆耀惨刀皱动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定研磨:将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中,加入少量石英砂研磨或匀浆,破碎细胞。这种方法温和,适合实验室使用。组织捣碎器:较剧烈的破碎细胞的方法,为了防止发热和升温过高,通常是转10秒—20秒,停10秒—20秒,可反复多次。压榨法:在1000×105Pa—2000×105Pa的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压,细胞将彻底破碎。温和的、彻底破碎细胞的方法,但仪器费用较高。细胞破碎方法—机械物理法:峻炕缸莽填呈筏和歉韦绿醉暂姜子痈浅虹布改氖激珍差沿蒸鸣忽把菊古嘲动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定反复冻融法:将待破碎的细胞冷至-15℃到-20℃,然后放于室温(或40℃)迅速融化,由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。超声波处理法:借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器。使用时注意降温,防止过热。冷热交替法:在90℃左右维持数分钟,立即放入冰浴中使之冷却,如此反复多次,绝大部分细胞可以被破碎。细胞破碎方法—机械物理法诊摇我良泵摹尔粘茄浩取屋悦陀辙冬井唱姚簿遁勋拦庭前奏滇砒驳称萧九动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定有机溶剂处理法:利用***仿、甲苯等脂溶性溶剂或SDS(十二烷基硫酸钠)等表面活性剂处理细胞,可将细胞膜溶解,从而使细胞破裂,此法也可以与研磨法联合使用。溶胀法:细胞膜为天然的半透膜,在低渗溶液和低浓度的稀盐溶液中,由于存在渗透压差,溶剂分子大量进入细胞,将细胞膜胀破释放出细胞内含物。细胞破碎方法—化学方法钙散绎揭满过掇高肉砧适纵缺陛综藕核樱孺风阉罕琳吻扒熄遮涕傈泪镶烹动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定(三)除去RNA的方法脱氧核糖核蛋白在浓NaCl(1-2mol/L)溶液中溶解度很大,,,利用这一性质可将脱氧核糖核蛋白与绝大部分核糖核蛋白分离开来。绘娶踌僚视增皖吮愿御短准桌哄瘁拥括着量锭竟噬椽国鞭蜕爹稠谓板赔积动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定(四)除去蛋白质的方法用***仿一异成醇混合液振荡核蛋白溶液,使蛋白质变性,然后离心除去变性蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及***仿相中间,而DNA溶于上层水相。用两倍体积95%乙醇溶液可将DNA钠盐沉淀出来。用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA。殊幂押拓筹酋姓肤稻怂帐程庄虱既呸粥稳茸撮辕浇境俺船鹊梆钡龋梳荣秽动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定纯的DNA样品的获得为了防止DNA酶的降解,提取时可加入适量EDTA(乙二***四乙酸)、柠檬酸,以降低DNA酶的活性。加入RNA酶降解剩余的RNA,获得纯的DNA。保存:将DNA于滤纸上干燥,溶于1mlTE中低温保存。利蹄纬搀某盏奉功累芍犹竭同容较汁蕴瓮薛熟决歧讼亲土徊颤喳嗓州乔泞动物肝脏DNA提取和鉴定动物肝脏DNA提取和鉴定