加热调控的溶瘤腺病毒载体构建及其特征研究.pdf

文档介绍：生物化学与生物物理进展
ProgressinBiochemistryandBiophysics
2009,36(12):1536~1543

加热调控的溶瘤腺病毒载体构建及其特征研究*
韦芳1) 王慧萍 1) 陈霞芳 1) 李川源 2) 黄倩1)**
(1) 上海交通大学附属第一人民医院中心实验室,上海 200080;
2) DepartmentofRadiationOncology,UniversityofColoradoHealthSciencesCenter,Aurora,Colorado 80111,USA)
摘要溶瘤腺病毒作为近年来新兴的肿瘤基因治疗策略,因具有“细胞溶解”和“旁观者效应”而备受关注. 构建了受热休
克蛋白 70(heatshockprotein70,HSP70)基因启动子调控的溶瘤腺病毒载体 Ad-HSP70p-E1A,观察该病毒与热疗联合应用对肺
癌细胞生长的抑制作用和带动治疗基因在肺癌细胞中表达的效果. 体外实验结果表明,Ad-HSP70p-E1A 在肺癌细胞株 A549
内能较好地实现自身复制,并产生一定的溶瘤作用,在联合热疗后,Ad-HSP70p-E1A 的自身复制能力和溶瘤效果分别增强
了 2~ 10 倍和 5 倍以上. 此外,Ad-HSP70p-E1A 还可通过反式提供 E1A 蛋白而使 10moi 用量的复制缺陷型腺病毒 AdGFP、
Ad-CMV-hGMCSF 和 Ad-CMV-mIL12 的表达提升 倍、5 倍和 7 倍.
关键词溶瘤腺病毒,HSP70 启动子,热疗,基因治疗,肺癌
学科分类号 Q78,R73 DOI: .
目前,肺癌的发病率和死亡率在全球范围内已 pAd/PL-DESTTM 购自 Invitrogen 公司,pShuttle-
迅速跃升至首位. 由于绝大多数肺癌患者在确诊时 CMV、 pAdEASY-1、BJ5183 菌种购自 Stratagene
已属晚期,仅能接受化疗或放疗,且治疗效果非常公司,均由上海交通大学附属第一人民医院保存.
差[1]. 基因治疗作为一种新兴的治疗手段,被期望转染试剂 Lipofectamine2000、TRIZOL 购自 Invitrogen
能在晚期癌症的治疗中发挥一定作用. 本研究以肺公司,反转录试剂盒 ReverseTranscriptionSystem
癌细胞作为研究对象,探讨基因治疗与热疗结合治购自 Promega 公司,限制性内切酶、T4DNA 连
疗恶性肿瘤,特别是肺癌的新治疗策略. 为此,我接酶、引物合成、SYBR PremixExTaqTM 购自
誖
们构建了受热休克蛋白 70 基因启动子(HSP70)调控 TAKARA 公司,质粒抽提纯化试剂盒购自 Qiagen
的溶瘤腺病毒载体 Ad-HSP70p-E1A,观察联合热公司,SeaplaqueTM Agaroselowmeltingtemperature
疗后病毒的复制能力和溶瘤效果,以及利用复制型 agarose 购自 CambrexBioScienceRockland 公司,
腺病毒带动携带治疗基因的非复制型腺病毒