文档介绍：肺癌、乳腺癌易感性的分子流行病学研究
蒋东华
【摘要】: 前言肺癌是最常见的恶性肿瘤,也是肿瘤死亡率中的首位死因。虽然烟草烟雾在肺癌病因学中的作用已经得到了公认,但却只有大约15%的吸烟者成为肺癌患者,提示个体间存在肺癌易感性差异。为保持基因组稳定性,细胞进化出DNA修复能力(DRC)。DNA修复是一个复杂的系统,有多条路径及多种酶参与其中,损伤形式不同则修复方式也大不相同。在哺乳动物中DNA修复方式主要有碱基切除修复(BER)、核苷酸切除修复(NER)、错配修复(MMR)、同源重组修复(HRR)和非同源末端连接(NHEJ)。因为人体细胞常常受到内、外源性基因毒性化学物的攻击,给定时间内DNA修复系统修复损伤的程度成为关键问题。宿主细胞再复活分析(HCR)方法可检测细胞的整体DRC。HCR分析使用带有氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因的质粒。该质粒被物理或化学因素破坏后,CAT就不能表达。将经处理和未经处理的质粒转染进入宿主细胞,检测CAT的表达差异。用破坏质粒/未破坏质粒基因表达的比值表示细胞的DNA修复活性。针对DNA修复系统的单核苷酸多态性(SNPs)研究很多,由于单一基因SNPs效应较弱而不适合作为肺癌易感性的标志物。而DRC检测涉及多重步骤,多个基因,将其作为肺癌易感性的标志物的意义将大于单个基因的SNPs。目的本研究旨在使用HCR方法检测研究对象的DRC,探讨DRC与非小细胞肺癌(NSCLC)易感性的关系,为筛检高危人群,进行肺癌一级预防提供理论依据。方法本研究采用病例对照研究方法,包括原发性NSCLC 107例,正常对照117例。按性别、年龄(±5岁)和吸烟状况进行频数匹配。采外周血分离淋巴细胞,存放于-80℃。用UVC(254nm)处理pCAT-control质粒,剂量分别为OJ/m~2和800J/m~2。分批次复苏淋巴细胞,植物血球凝集素(PHA)刺激下培养72h后用DEAE-葡聚糖方法转染质粒。转染后44h提取细胞裂解物存放于—80℃。解冻的细胞裂解物与~3H-氯霉素作用后,用液体闪烁计数仪检测闪光数。每个样本的DRC(%)=(受损质粒闪光数/未受损质粒闪光数)×100%。将DRC作为一个连续变量比较病例与对照差异。以对照组DRC值的中位数作为分割点,将研究对象分为DRC优和DRC差两组,估计其作用于各组织学类型的OR值。以对照组吸烟指数的中位数作为分割点,将研究对象分为轻度吸烟者和重度吸烟者两类,估计其作用于组织学类型的OR值。并估计DRC与累积吸烟量联合作用于各病理类型的OR值。结果 1、一般性结果分析病例与对照间性别、年龄和吸烟者以及吸烟指数均无统计学差异。%,%(P<)。按性别和年龄(60岁)分层后,各层中对照组的DRC均显著高于病例组。在病例和对照中,男性的DRC均显著高于女性。在按年龄分层的比较时,对照组中低年龄组DRC显著高于高年龄组,而病例组中则未见此种差异。提示个体DRC与性别和年龄有关。按吸烟状况分为非吸烟者、戒烟者和吸烟者三层。按对照组吸烟指数中位数分为轻度吸烟者和重度吸烟者两层。各层中对照组DRC均显著高于病例组,而病例组和对照组内部则未见显著性差异。按不同组织学类型、病理分期和分化程分层后发现各层DRC均显著低于对照组。 2、DRC和累积吸烟