文档介绍：浙江大学医学院
博士学位论文
2E8-NCTD-脂质体体外靶向B系白血病干细胞及机制研究
姓名:张晶樱
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:汤永民
20091001
籒侍逄逋獍邢蛏鄙薆系白血病干细胞及机制的研究中文摘要浙江大学医学院博士研究生导师儿科学血液肿瘤汤永民张晶樱研究背景和目的:盗馨拖赴籽2∈嵌<亩裥灾琢觯壳盎迫允嵌云渲瘟频闹饕J段。虽然大部分患儿对初始化疗反应较好,但约有%左右的患儿由于不能耐受常规化疗非特异性毒副作用,导致化疗失败或白血病复发。最近研究发现:从淋巴细胞白血病患儿的体内分选出南赴⑸淙胄律疭∈筇迥谀艹こ鯞系白血病细胞,而瓹瓹注射入新生的疭∈筇迥谠虮硐治U5南赴硇汀?杉赴哂凶晕腋潞臀尴拊鲋车哪芰Γ湟餐耆ú煌谒柘白血病干细胞.,是一类新的干细胞群一一礚R虼耍珻是礚捌渥哟籽2∠赴砻娴奶匾煨员昙牵前邢蛏鄙薆系捌子代白血病细胞的良好靶点。目前以单克隆抗体タ为基础的靶向治疗是白血病治疗最有前途的方法之一。】。免疫脂质体是靶向治疗的分支之一,具有单抗导向和脂质体药物传输的双重特性。将免疫脂质体包封抗肿瘤药物,不但可将大量的药物分子特异地传输到肿瘤细胞,还可显著减少对正常组织的非特异性毒性作用。据报道大量的药物分子甚至可以克服肿瘤耐药【】.目前,
和长春新碱侍宓仍谔逋饽芟灾黾佣訡的白血病细胞的细胞毒作用,在体内能显著延长的P托∈,在先前的研究中,我们已证实庖叨舅囟訡的白血病细胞具有明接,研制成—鄄旄妹庖咧侍灏邢蚴侗鸩⑸鄙薆系及其子代白血病细胞的作用,阐明其靶向杀伤的机制,:;并用流式细昙堑牧字R掖及芬,加入脂质体的磷脂中唤岷蟂分析法和鞍着ǘ燃觳夥ǹ疾系血液肿瘤的研究已取的了令人鼓舞的结果,如靶向的柔红霉素量所导致的耐药问题。然而目前报道的免疫脂质体不能有效清除,因为象蚔等常规化疗药不能作用于静止期的。去甲斑蝥素歉上赴匾煨缘纳鄙艘┪铮渫ü抑制千细胞相关的抗凋亡轴一一即下调/【】。但对正常的杀伤作用在一定程度上削弱了其对的治疗优势。显的靶向杀伤作用【А本研究拟采用免疫脂质体技术,将包封于脂质体中,并与タ沽方法:单克隆抗体的制备:;甈橹础。浙江人学博学位论义中义摘受
是否以完整的形式插入脂质体表面;,徒】嫡咄庵苎V蠺、⒕。单抗修饰的去甲斑蝥素脂质体闹票讣捌兰首先建立脂质体包封率检测的高效液相色谱法。采用薄膜分散法制备.⑼ü。测定脂质体的包封率;激光粒度测定仪检测其粒径;,,.琄的靶向效率和差异;:ㄆ兰..琋和游离的对不同细胞株,.的细胞毒作用,并计算各自值...陌邢蛏鄙嘶采用激光共聚焦显微镜和观察甆通过芴褰导的内化作用将转运至细胞内的现象。⑸蛲龈谋凋亡小体和流式细胞术和双标法觳..⒍考觳庀嗤ǘ鹊...ü:单克隆抗体的制备及鉴定:从/∈蟾顾写炕竦酶叽慷抗浙江人学博学化论义中义摘要
,经流式细胞术检测,訬细胞的靶向识别效率为.%,.%。当疢—瓺哪Χ任猯:..赴跤螅谟疑舷笙蘅晒鄄斓絉标记的脂质体的红色荧光北攴与瓼昙的绿色荧光浔攴成一一对应的直线关系,而在馨拖赴籽2∠赴闙细胞中未观察到相似的结果,提示胫侍辶映晒ΑA>恫舛ㄒ羌