文档介绍：年月第卷第期·基础研究·
诱导增殖与提高其胶原表达水平的细胞模型研究
杨德民王健
.吉林省吉林中西医结合医院,长春;.北京中医药大学,北京
【摘要】目的建立较为全面反映肝星状细胞活化效应的细胞模型。方法应用脂多糖刺激体外培养的大鼠。法测
定增殖率。免疫组化法显示表达、Ⅲ型胶原水平,并进行图像分析。结果明显刺激的增殖和提高其
、Ⅲ型胶原表达水平,
活化效应。
【关键词】肝星状细胞;脂多糖;胶原
【中图分类号. 【文献标识码】【文章编号】———

谇
.,;.,
】.
..
.——
.
.
【】;;
在肝纤维化形成过程中,肝星状细胞, 于含%胎牛血清的培养基中,在含% :的
的活化对肝纤维化形成起到关键作用。在肝纤维化的研究培养箱中培养~周,消化收获细胞。用含%胎牛血清的
中,大量的体外实验研究是利用的体外培养进行研究。因培养基将细胞调至所需浓度,接种于孔平底培养
此,选择合适的细胞模型对于实验研究具有重要意义。以往的研板中,细胞数为个/孔。培养细胞贴壁后,换用含%
究多采用、或等细胞因子刺激活化,其结果胎牛血清的培养基,同时加入不同浓度的。终
常不能全面反映的活化效应。本研究试用脂多糖—浓度分别为./ 、. /、.
,刺激大鼠,探索建立了刺激增殖并、./,分别培养、、。每个浓度设
提高胶原表达水平的细胞模型。复孔,法测定细胞增殖率。每组实验动物只。
法测定细胞增殖率参照徐承熊方法目。
材料与方法细胞增殖率%测定细胞值/对照细胞值%
. 大鼠..对表达、型胶原的刺激作用取培养~
中国医学科学院动物所提供雄性大鼠体重周的大鼠,用含% 胎牛血清的培养基将细胞
,分离方法参照徐列明方法【。调至所需浓度。在孔平底培养板中放人盖玻片,加入细胞,细
. 仪器与试剂胞数为个/孔。培养细胞贴壁后,换用含% 胎牛血
培养基为公司产品。胎牛血清由杭州四季清的培养基,加入,终浓度分别为. /
青生物工程材料有限公司生产。培养板为美国产品。、. /,分别培养,取出盖玻片,冷丙酮
、、均为公司产品。兔抗、型胶原抗体, 固定,室温晾干,一℃保存。每组实验动物只。
显色剂购自武汉博士德公司。辣根过氧化物酶标记羊抗兔. 免疫组化染色取保存备用的细胞片,间接法免疫组化
抗体为美国公司产品。酶联仪为日本产—。图染色,显示细胞内、Ⅲ型胶原的表达。第一抗体为兔抗、Ⅲ型
像分析仪为美国品,一—胶原抗体:,第二抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔
抗体:。
. 实验方法. 图像分析
.. 对增殖的刺激作用取分离的大鼠接种免疫组化标本用图像分析仪进行半定量分析。每份标本测
中国现代医生
· 基础研究· 年月第卷第期
定个视野灰度值。计算平均灰度值为该标本的测定结果。量增加,但细胞产生胶原数量减少;后者刺激可见明显增加
. 统计学处理胶原的表达,但细胞增殖受抑制。这些改变虽不同程度上满足了
,实验结果数据用±表示,统计研究者的研究需要,但也暴露出该细胞模型并未很好地模拟出
方法为方差分析,组问比较用检验。肝纤维化形成过程中体内的变化状态。有的研究者指出