文档介绍：南华大学
硕士学位论文
DATS对HL-60细胞NADPH氧化酶活性的影响及机制
姓名:田志臻
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:唐圣松
20070501
原创性声明
本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工
作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的
地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包
含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共
同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。
作者签名: 日期: 年月日
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权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论
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学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。
作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
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DATS 对 HL-60 细胞 NADPH 氧化酶活性的影响及机制
中文摘要
目的:研究 DATS 对 HL-60 细胞 NADPH 氧化酶活性的影响及机制,寻找
DATS 诱导 ROS 产生的靶点,为抗肿瘤治疗提供新的靶点。
方法:硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测 NADPH 氧化酶活性;RT-PCR
检测 NADPH 氧化酶亚基 mRNA(gp91phox, p47phox, p22phox, Rac2 和 Rac1)的表
达;Western blot 检测蛋白(p67phox,gp91phox 和 Rac2)表达变化。
结果: DATS处理HL-60细胞1小时,NBT 还原反应阳性率与对照组相比
差异无显著性( P > ) ;DATS处理HL-60细胞3小时,NBT 还原反应阳性率呈
浓度依赖性增加, 150μM 为峰值;DATS处理HL-60细胞6小时,NBT 还原反应
阳性率在100μM达到峰值,之后浓度依赖性下降;处理12小时后与对照组相比
差异无显著性( P > )。
DATS能诱导HL-60细胞内NADPH氧化酶复合物成分mRNA(gp91phox, p47phox,
p22phox, Rac2和Rac1)和蛋白(Rac2和gp91phox)的表达,这种诱导效应有时间和
浓度依赖性。用150μM DATS处理HL-60细胞0h-12h, NADPH氧化酶各亚基
mRNA表达水平,在1小时开始升高,在3小时达到峰值; NADPH氧化酶亚基Rac2
和gp91phox蛋白表达在3小时达到高峰,亚基p67phox的蛋白表达与对照组相比无明
显变化。用不同浓度的DATS处理HL-60细胞3小时,mRNA(gp91phox, p47phox,
p22phox, Rac2和Rac1)表达在DATS浓度为150μM达到峰值。Rac2和gp91phox亚基
蛋白表达有浓度依赖性,p67phox蛋白表达与对照组相比无明显变化。
DATS 处理 HL-60 细胞后引起 NADPH 氧化酶 Rac2 和 p67phox 的转位。DATS
处理 HL-60 细胞后,p67phox 亚基和 Rac2 亚基在胞浆中的含量降低,而在膜中的
含量升高,Rac2 和 p67phox 在 DATS 处理后从胞浆转位到胞膜,并且这种变化有
时间依赖性和浓度依赖性,用 150μM DATS 处理 HL-60 细胞 0h-12h, Western
blot 结果显示:Rac2 和 p67phox 的转位在 3h 时达高峰(P<)。用不同浓度的
DATS 处理 HL-60 细胞 3 小时,Western blot 结果显示 Rac2 和 p67phox 的转位时间
依赖性的增加。
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结论:1、 DATS 能诱导 HL-60 细胞 NADPH 氧化酶活化。
上调 NADPH 氧化酶亚基 gp91phox, p47phox, p22phox, Rac2 和
Rac1 的 mRNA 表达
3. DATS 上调 NADPH 氧化酶亚基 gp91phox 和 Rac2 的蛋白表达水平,
但 p67phox 亚基蛋白表达无明显变化。
4. DATS 诱导 HL-60 细胞 NADPH 氧化酶的 p67phox 和 Rac2 亚基从胞
浆转位到胞膜。
关键词:二烯丙基三硫;白血病;ROS;NADPH 氧化酶