文档介绍：中国科学院大学博士学位论文利用转录因子诱导人类胚胎干细胞定向分化的研究裣耰琂
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谨以此博士学位论文献给我的导师肖磊教授以及我的家人,朋友和同学利用转录因子诱导人类胚胎干细胞定向分化的研究致谢中围科学院大学卜海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所博二学位论文
利用转录因子诱导人类胚胎干细胞定向分化的研究饶灵均锘в敕肿由镅导师:肖磊教授摘要人类胚胎干细胞越⒁岳淳捅蝗衔J茄芯糠⒂镅В幸物筛选以及用于再牛医疗的有力:具。哂性谔逋馕尴蘩┰龅哪芰头只为三个胚层所有细胞的潜能,这些特性结合在一起就可能满足目前的替代治疗中进行大规模细胞移植时所需的细胞量。与小鼠胚胎干细胞煌詇的转基因操作效率较低,这限制了谘芯糠⒂突蚬δ芊矫娴挠τ谩W近有研究表明基于慢病毒载体的猳盏枷低晨梢员冉细咝У卦趆中调控外源基因的表达,也有人使用类似的方法诱导ㄏ蚍只I窬托募∠赴目前厂。泛使用的诱导分化方法需要通过形成拟胚体,在培养环境中加入不同生长因子,与其它细胞共同培养以及进行细胞分选等方法来实现,与之相比通过控制转录因子的表达诱导细胞分化的效率更高,花费的时间也更少。而且通过研究不同转录因子对细胞分化的影响也有助于我们理解细胞分化的信号机制,并对传统的分化手段进行优化和改善。通过将只9趋兰∠赴梢越⑵鹨桓鲈谔逋庋芯咳死喙趋兰》育的良好模型,而且获得大量可移植的成肌细胞也被认为是治疗某些肌肉退行性疾病如杜氏肌营养不良症的方法。与肌肉卫星细胞相比,谔逋饪梢晕榷的培养,大量扩增,具有数量上的优势,然而目前建立的骨骼肌分化方法都较为复杂,耗时太长。另一方面,转录因子在发育过程中的在时间和空间上的表达模式足十分重要的,因此在细胞分化过程中通过调控转录因子在不同的时间表达和表达的持续时间可以帮助我们更好地理解发育和分化过程中细胞的不同命运是如何决定的。利用转录因子诱导人类胚胎干细胞定向分化的研究摘要中国科学院大学上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所博士学位论文
关键词:趋兰。琈ㄏ蚍只琓·赴耍琋在本课题中我们发现通过过表达成肌调节因子家族的成员,可将高效地诱导为骨骼肌细胞,整个分化的过程经历了多能的胚胎干细胞,中胚层细胞,肌肉前体细胞,成肌细胞,和终末分化的多核肌管这几个阶段,这与在小鼠中研究的胚胎发育时肌肉发生的过程类似。通过对表达持续时问的控制我们发现外源持续表达一周的时间就足以诱导蚬趋兰∠赴姆只完成整个分化的过程则需要彳搅街埽钪栈竦玫闹漳┓只墓趋兰∠赴烧细胞总量的%左右。据我们所知,这是首次通过申个转录因子诱导谔外分化为终末的成体细胞,这也将为诩∪馔诵行约膊≈械挠τ么蛳乱欢基础。另外,我们还发现在不同分化状态的衅舳认俜⒂墓丶B家蜃的表达可分别诱导只@嗨粕窬;蛞认倌诜置谙赴南赴>管对获得的分化细胞特征还需要深入鉴定,分化的条件也需要进一步优化。这些结果仍将有助于我们通过耘咛シ⒂拖赴司龆ń懈嗟牧私狻利川转录冈子诱导人类胚胎下细胞定向分化的研究摘要中国科学院大学上海生命科学研究院生物化学与细胞牛物学研究所博士学位论文
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目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.挠τ眉壑怠对细胞命运改变的研究现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.牧嫌敕椒ā实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯主要试剂和试剂盒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..感受态细菌的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.质粒的大量制各⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯细胞培养相关试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..分子克隆相关试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯小鼠胚胎成纤维细胞嘌母此铡目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..璉言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.人类胚胎干细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.菌株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.抗体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯