文档介绍：北京协和医学院;中国医学科学院
硕士学位论文
SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶原核和真核表达及纯化
姓名:张蕾
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:刘力
20090501
中文摘要定点突变技术将槐湮狝,即将甘氨酸突变为丙氨酸,并构建突变,怯梢恢中滦偷墓谧床《放阅读框,基因组结构与其它冠状病毒相似,基因序列与原先发现的冠状病毒的同源性不高,被列为冠状病毒科的新类型。其编码的蛋白质推测有种,但对感染患病起重要作用的可能是止丶鞍祝篍蛋白、鞍住蛋白、鞍住⒌鞍酌父春病毒的蛋白酶复合体编码区占基因组序列长度的,相应的转录产物在翻译时利用特有的核糖体移框撇礁龃笮〔煌样胰凝乳酶,呖勺陨硭庀龀墒斓母粗泼Mü幌盗猩镄畔⒀比对,在此个非结构蛋白中发现览敌跃酆厦,存在高度保守的稳定细胞中生命活动的开始,复制酶蛋白复合体及其水解产物对于病毒基因组的复制、亚基因组的转录以及翻译后的调节起到重要作用,而目前这种分子机制仍不清晰。基因的全长,分别克隆入真核表达载体和原核表达载体。真核表达蛋白并研究其细胞定位。原核诱导融合蛋白,并纯化此蛋白,为了进一步研究蛋白的功能做准备。利用的真核和原核表达载体—⒌难现氐募毙院粑综合征,弓鸬摹《臼侨ɑ蜃閒,龊塑账嶙槌桑哂隹体,蛋白酶复合体分成个蛋白,其中包括览档腞聚合酶和嗦肟虮嗦肽竟纤獾鞍酌,蛋白喾墙峁沟鞍祝琻结构域,并且几乎所有的正链《径急嗦胗蠷依赖的酆厦福渲蠫基序高度保守的,可能与酶的催化功能相关。冠状病毒复制酶蛋白的合成是病毒在本课题包括的研究内容有:..甈。原核诱导突变型融合蛋白,并纯化此蛋白,为下一步比较野生型和突变型体外合成墓δ茏髯急浮本实验中,,用産椒ḿ觳獾狡北京协和医学院硕士学位论文琑。
成功表达,并在共聚焦显微镜下观察蛋白在赴亩ㄎ唬煌ü菇在细胞质。成功构建表达突变型和野生型融合蛋白的原核表达载体,在大肠合蛋白,为进一步探讨的功能奠定基础。.,诱导表达后纯化得到野生型和突变型重组蛋白。结论:成功构建的真核表达载体,在真核细胞中过表达的蛋白主要定位杆菌内高效表达,纯化后得到分子量约为的野生型和突变型融关键词:览档腞聚合酶;原核表达;真核表达;定点突变;蛋白纯化北京协和医学院硕士学位论文
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学位论文作者签名:娩争莎独创性声明学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解咳K芸锾猛泄乇4妗⑹褂醚宦畚牡墓芾阅和借阅。本人授权咳K芤教藐芽梢越宦畚牡娜ú炕虿糠帜谌荼嗳胗泄过的研究成果,也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。通讯地址:河北省徐水县安肃镇隆宝胡同号楼时啵本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人已经发表或撰写意。学位论文作者签名:签字日期:年日C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签名:年签字日期:年学位论文作者毕业后去向:工作单位:暂无电话:北京协和医学院硕士学位论文
普士刖『舌瓹貌《驹诜掷嘌鲜粲谟锌遣《灸、冠状病毒科⒐谧床《臼病毒。分离到的禽传染性支气管炎冠状病毒。年分离出鼠肝炎病毒:年培养分年采用人二倍体细胞分离出人病毒;年分离病毒闖蚑等通过电镜形态学观察,发现这些病毒颗粒的外膜上存在日冕或皇冠状的突起,根据形态学上的这一特征建议命名为冠状病毒。年国际病毒命名委员会正命定名这类病毒为冠状病毒科【。要为哺乳动物和人冠状病毒,第槲G堇喙谧床《尽第榘ǎ喝谧床《尽⒚ǔΦ拦谧床《尽⑷斯谧床《⒅砹餍行愿剐病毒和猪传染性胃肠炎病毒鲋郑毒、鸟嘴海雀