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文档介绍

文档介绍:重庆医科大学
博士学位论文
SARS冠状病毒N蛋白的细胞定位及其RNA干扰研究
姓名:陶鹏
申请学位级别:博士
专业:内科学(传染病)
指导教师:黄爱龙
20050501
指导教师签名:三邋学位论文作者签名:幽啦一日期:焖躘:主:£孛嘶学位论文版权使用授权书重庆医科大学研究生学位论文独创性声明期:五舶畆、论文作者签名:,,,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,印:研究生在攻读学部门或机构送交论文的复印件和磁盘,,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。日
英汉缩略名词对照表中文全称脱氧核糖核酸三磷酸脱氧核糖核苷双链胎牛血清干扰素免疫球蛋白干碱基对英文缩写英文全称碱基对互补脱氧核糖核酸二甲基亚砜乙二胺四乙酸异硫氰酸荧光素绿色荧光蛋白乙肝病毒丙型肝炎病毒人类免疫缺陷病毒辣根过氧物酶千道尔盹培养基加氨苄青霉素的培牛血清白蛋自溴乙锭养基加卡那霉素的培养猙基莺庆医科大学博士研究生学位谂文·—.痭
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微克微升重庆医科人学博士研究牛学位论文一
暴状病毒鞍椎南赴ㄎ患捌銻干扰研究摘要体,将两种重组载体共转染赴蠊鄄靤对冠状病毒方法:首先用两种蛋白分析软件蚉将带有蛉ǔさ闹刈閜,载体转染赴τ妹庖目的:构建增强型绿色荧光蛋白与冠状病毒不同长度核衣壳蛋白区段融合表达的狢刈樵靥澹细胞进行瞬时转染,显微镜下观察核衣壳蛋白不同区段在细胞内的定位;构蛋白的融合表达载体以及各结构基因的短发夹状表达载治鯯谧床《竞艘驴堑鞍琋蛋白蛄校页銎渲械暮硕ㄎ恍藕琋蛄小段,分别与载体狢樱玫讲煌ざ萅噋蛋白的重组表达载将重组的狢靥遄H细胞,分别在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察不同长度核衣壳蛋自在细胞内的定位。同时,建增强型绿色荧光蛋白与冠状病毒狢鹘峁结构蛋白表达的影响。┰龌蛉斯ず铣蒘谧床《静煌ざ群艘驴堑鞍谆蚱体。珻重庆医科大学博士研究隹学位论文
隆于,。胞,于转染后、、鄄炻躺ü獾鞍妆泶锏那咳酰捎肳琼脂糖凝胶电泳显示扩增出蛉ǔぃ盖械缬炯安庑蚪峁荧光方法则察鞍椎恼婧讼赴ㄎ弧载体狢樱玫礁鹘峁沟鞍椎闹刈楸泶镌靥濉I杓啤⒑铣冠状病毒各结构基因的蛄校朐靥錺连接,得将构建成功的重组狢胂嘤Φ膕质粒共转染分别检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的表达,逆转录觳饽康示蛉ǔぁ及片段—。免疫荧光法的结果与绿色酶切电泳显示含冠状病毒各结构基因的重组瓹及重组牟迦胄蛄姓贰人工合成冠状病毒各结构基因片段、直鹩到各结构基因的泶镏柿!基因的水平。结果:不同的核定位信号分析软件分析的结果不同,业的核定位信号位于鞍椎..鳳找到的核定位信号位于鞍椎赴缓蠳基因片段的重组瓹H竞螅晕⒕。
细胞质和细胞核,。主题词:冠状病毒,核衣壳蛋白,细胞定位,短发夹状雜质粒共转染赴螅菇ǖ母鞲柿W饔眯视泻艽蟛钜臁V挥衟甆斜冉厦飨缘幕沉默效应,其余柿C挥谢蛑挥泻苋醯腞干扰作用。与未干扰组相比,—作用组绿色荧光强度明显减弱,而无关制作用,而无关序列的薮俗饔谩结论:成功构建了含冠状病毒不同长度蚱蔚闹刈成功构建了含冠状病毒各结构基因的重组瓹靥不同序列的虺聊вσ膊煌U攵許谧床《綨有特异性。本研究为进一步用扇偶际跻种芐谧床《镜母制奠定了基础,从而为的抗病毒治疗提供了一种新的思路。重组狢—平赵靥遄橛ü,并且具扇牛共《荆蛑瘟莺庆医科人学博士研究生学位论文