文档介绍：中山大学
硕士学位论文
广州管圆线虫组织蛋白酶-Z基因的克隆表达及其免疫学鉴定
姓名:岳永亮
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:詹希美
20100520
广州管圆线虫组织蛋白酶一虻目寺表达及其免疫学鉴定中文摘要专业:病原生物学研究生:岳永亮导师:詹希美教授中山大学中山医学院寄生虫教研室广州管圆线虫病为一种人兽共患病,其病原体为广州管圆线虫,9阒莨茉蚕叱嬗虫在人体侵犯中枢神经系统,引起嗜酸性粒细胞增多性脑炎或脑膜炎。除大脑和脑膜外,病变还可波及小脑、脑干和脊髓。主要病理改变为充血、出血、脑组织损伤及肉芽肿性炎症。病人最明显的症状和体征为急性且止痛药难以缓解的剧烈头痛和脑膜刺激征,还可伴有皮肤感觉异常,颈部运动疼痛、乏力,严重者可致昏迷甚至死亡。广州管圆线虫病主要流行于东南亚、南美及环太平洋国家和岛屿等地区。自从年台湾首次报道广州管圆线虫病以来,我国大陆不断出现新发病例的报道。在北京、浙江、云南等多个省份甚至出现了暴发流行。于年我国卫生部将广州管圆线虫病其列为新发传染病,说明该病在我国己引起高度重视。由于该病缺乏特异的临床症状和体征,常被误诊为其他神经系统疾病而错误治疗或延误治疗而造成严重后果。因此广州管圆线虫病早期、准确的诊断在该病防治过程中起着非常重要的作用。”泶锛懊庖哒锒涎С醪窖芯本课题由:广东省政府一国家自然科学联合基金资助;钅鹱手
研究目的研究方法临床诊断主要依据患者有吞食或接触含虫的中间宿主或转续宿主的经历及临床症状,以患者脑脊液中查到虫体为金标准,但此法检出率低。目前实验室最常采用ḿ觳獠∪搜G逯械奶匾炜固濉S糜贓检测的包被抗原通常为粗抗原,然而与其他寄生虫有一定的交叉反应。近年来相继有报道使用纯化抗原作为包被抗原检测病人血清和脑脊液中的抗体,在一定程度上降低了交叉反应。但获得纯化抗原不但费时费力而且要大量获得较困难。因此,筛选出具有高敏感性和特异性的抗原组分,获得其编码基因,表达融合蛋白对广州管圆线虫病免疫诊断研究具有重要意义。,,可能足广州管圆线虫病早期诊断的抗原候选分子。”泶锊⒍云湓诿庖哒锒现械挠τ米隽顺醪窖芯俊没蚬こ碳际蹩寺」阒莨茉蚕叱孀橹鞍酌颍擞蒙镄畔⒀Х椒对其核苷酸及推导的氨基酸序列进行初步预测分析以了解蛋白质的特性;菇ü阒莨茉蚕叱孀橹鞍酌蛟吮泶锵低常呕泶锾跫曰竦萌诤蛋白的高效表达。脀産和治龆云涿庖咴约翱乖越谐醪窖芯浚远其血清学诊断价值做出客观评价,为研制理想的广州管圆线虫病诊断试剂盒奠定基础。提取广州管圆线虫四期幼虫的总捎胏谝涣春铣墒约梁校菟明书进行合成广州管圆线虫病四期幼虫的总第一链。。ㄌ逋饫┰龈没颍ㄏ蚩寺≈;。诱导表达融合蛋白,表达产物经甈分析及産鉴定。优化表达条件使上述工程菌高效表达目的蛋白。亲和层中山大学硕士学位论文广州管圆线虫组织蛋白酶的克隆表达及免疫诊断学初步研究
研究结果关键词:广州管圆线虫;。辉吮泶铮幻庖哒锒结论:析法纯化分离目的蛋白,纯化蛋白免疫/∈ê图觳狻竦昧斯阒莨茉蚕叱孀橹鞍酌福甖基因的完整读码框,通过生物信息学分析,,>哂泄成真核生物半胱氨酸蛋白酶活性中心的三个氨基酸残基。该蛋白具有分泌型信号肽,未发现线粒体等亚细胞定位序列,没有跨膜序列。晒寺±┰隽四康幕浴9菇ǖ膒..甖重组质粒经ā⑺ü菇ǖ膒..刈橹柿3晒ψ;,经甈治鲇肽康牡鞍椎睦砺鄯肿恿肯喾産分析融合蛋白可被抗固迨侗稹1泶锊锞缀筒阄龃炕得到纯化的融合蛋白。庖哂〖<岸锸笛橹っ魅诤系鞍拙哂忻庖咴约翱乖浴法检测广州管圆线虫感染阳性小鼠血清、其它寄生虫感染病人血清及正常人血清,,其特异性优于粗抗原,敏感性与粗抗原无差异。竦昧斯阒莨茉蚕叱孀橹鞍酌缘耐暾蛄校晒菇藀..甖重组质粒,并在大肠杆菌中表达融合蛋白。阒莨茉蚕叱孀橹鞍酌福畓融合蛋白对广州管圆线虫感染的检测具有很好的敏感性和特异性,有望代替粗抗原实现经济的免疫学诊断。本研究为研制新型广州管圆线虫诊断