文档介绍：(U)与比活力
U=速度单位
例如
每小时催化1克底物
每小时催化1ml某浓度溶液
每分钟催化1ug底物
酶产品质量评价中常使用比活力
单位质量酶产品中酶活力称比活力。
u/mg酶蛋白 u/ml酶蛋白
酶活力测定实例
首先确定反应条件 20℃、pH=7,底物浓度 6g/l(过量),加入2mg固体脂肪酶
第二确定活力单位如每小时催化1克底物 1u= 1g/h
第三测算反应初速度作产物甘油随时间增加的曲线,量出反应初速度值,换算为脂肪的消耗速度如 8g/h
第四换算活力 8g/h / 1g/h=8u
第五计算比活 8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白
脂肪
脂肪酶
甘油+ 脂肪酸
影响酶促反应速度的因素(作单因子考虑)
反应初速度随底物浓度变化曲线
(或质量)
提问:何种关系?
答案:正比
机理——中间产物
E + S ES P + E
k1
k2
k3
条件:他们的浓度分别为[E]、[S]、[ES]、[P]
总酶浓度[Et]
稳态时
反应速度
V=k3[ES]
ES的生成速度=消耗速度
k1[E][S]=k2[ES] + k3[ES]
E的质量平衡方程
[E]=[Et] - [ES]
E + S ES P + E
k1
k2
k3
V=
V[S]
Km + [S]
米氏方程
V=Vmax=k3[ES]max=k3[Et]
Km=
k2 + k3
k1
米氏常数
[S]很小时
V=V[S]/Km 一级反应
反应初速度随底物浓度变化曲线
米氏曲线
V=
V[S]
Km + [S]
[S]很大时
V=V[S]/[S]=V 0 级反应
混合级
Km=?
Km = [S]
V=
V[S]
Km + [S]
若 V=V/2
V
2
=
V [S]
Km + [S]
1
Km + [S] = 2[S]
与酶及底物种类有关,与酶浓度无关,可以鉴定酶。
酶
底物
Km(mmol/L)
脲酶
尿素
25
溶菌酶
6-N-乙酰葡萄糖胺
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶
6-磷酸-葡萄糖
胰凝乳蛋白酶
苯甲酰酪氨酰胺
甲酰酪氨酰胺
乙酰酪氨酰胺
Km=
k2 + k3
k1
Km≈k2(分离能力)/k1(亲合能力)
E + S ES P + E
k1
k2
k3
Km越小,亲和力越强。底物浓度很小时,反应速度就能达到很大,性能优,代谢中这类酶更为重要。
当k2>>k3时(通常都是这样)
米氏方程变化
1
V
=
Km
V
·
1
[S]
+
1
V
V=
V[S]
Km + [S]
以1/V ~ 1/[S]作图( Y=aX+b )
纵截距=1/V
横截距=-1/Km
C. pH的影响
最适pH时的酶活力最大
胃蛋白酶
木瓜蛋白酶
胆碱酯酶
胰蛋白酶
酶最适pH,因酶而异,。
相对酶活力
过氧化氢酶
胃蛋白酶
胰蛋白酶
精氨酸酶
延胡索酸酶
RNA酶
提问:pH对酶活力产生影响的原因?
答案:影响弱酸碱基团解离,影响契合,影响催化