文档介绍：菊粉酶的分离纯化及固定化研究广西师范土学硕士研究生学位论文院系年级业方向师研究生完成时间生命科学学院级野生动植物保护与利用保护生物学陈燕珍副教授闰位娟年专导
菊粉酶的分离纯化及固定化研究摘要菊粉是由果糖—键连接而成的线性直链多糖,聚合度约为┒顺4幸桓銎咸烟【俊>辗勖,—.蔷辗的水解酶,能够将菊粉快速水解成为果糖或低聚果糖,水解产物果糖具有甜度高,热值低,不易引起龋齿,易被糖尿病人利用等优点【浚旱途酃且彩且种功能性糖,它是双岐杆菌的增殖因子,有多种生理功能,调节胃肠功能,有效抑制有害菌的生长,提高免疫力,改善脂质代谢,降低血脂和胆固醇,促进矿物质的吸收,有利于维生素的合成等。由于二者优越的生理功能,在营养保健、医药工程和能源开发等各个方面都有较好的应用前景。固定化菊粉酶水解菊糖生产高果糖浆或低聚果糖等产物,能达到反复利用,连续操作,简化产品分离纯化的目的,而且工艺简单,底物转化率高,产物纯,成本低,因此研究固定化菊粉酶对获得一种能符合工业要求的生产果糖或低聚果糖的方法具有重要的现实意义。目前工业化利用菊粉生产低聚果糖的制约因素有天然的菊粉酶活性不高,及菊粉酶重复使用的效果不佳等。本文从菊粉酶的分离纯化、菊粉酶固定化方法的筛选、固定化菊粉酶酶解反应及产物鉴定等三个方面出发做了研究,希望能从上述几方面努力找到一种价格低廉、工艺简单方便、转化率高、重复利用率高的固定化方法,为~步酶法生产果糖和低聚果糖提供参考数据。⒃诰辗勖傅姆掷氪炕矫妫狙芯糠直鸩捎闷暇厶悄翰阄龊虳纤维素离子交换层析两种方法进行菊粉酶的分离纯化,目的是通过简单的分离纯化方法能达到较好的分离效果,从而节约材料和简化分离步骤,为固定化酶提供更纯的菊粉酶,同时降低生产成本。⒃诠潭ɑ椒ǚ矫妫究翁獠捎镁垡蚁┐迹T逅岣包埋法、生命科学学院级研究生:闰惶娟野生动植物保护与利用专业燕珍保护生物学方向导师:陈珽
、通过对三种固定化方法的研究比较,大孔树脂吸附交联固定菊粉温度交联,制得的固定化酶用蒸馏水冲洗次后备用。在上聚乙烯醇一海藻酸钙—於┙涣0穹ā罂资髦浇涣7固定化菊粉酶,并采用正交实验对罂资髦浇涣7ń杏呕跫纳选。⒐潭ɑ辗勖该附夥从捌洳锛ā结果表明:幌宋乩胱咏换徊阄龇掷刖辗勖柑岽勘妒叽,ü齈缬炯觳庥欣Ψ逯挥小醯鞍状已达电泳纯。酶效果较好。其固定化酶的最佳条件是:树脂加】菊粉酶液,,述条件下可获得活性为盍厥沾%,比同类报道高%。颉⑼ü潭ɑ阜峙夂土饩辗奂安锓治觯辗勖杆獾孜的主要产物为果糖及少量葡萄糖,固定化酶连续水解菊粉米灾频墓潭ɑ冠,固定化酶,底物.,进料速度为/婧阄,反应蟮孜镒;蚀%。关键词:菊粉酶分离纯化固定化吸附交联法
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果聚糖的非还原端逐个切下单糖馇忻富钚,或在分子内部随机切断某超高果糖、低聚果糖和菊糖成为广大消费者追求健康生活的首选糖源。主要有以下几大优越的物理、在人体新陈代谢过程中,果糖可直接被肠壁吸收,从而进入第一章综述菊粉酶,.且焕—稤果聚糖酶,可从个,擒占内切酶活性ひ瞪嫌美瓷吖墙虻途酃恰它来源丰富,但主要来自于微生物。昃头⑾諷以及其它一些酵母菌能够利用菊粉。随后蚔蚐都证实了能够在菊粉上生长,年首次报道了懿辗勖浮<改旰螅珹等人发现从不同酵母菌中提取并经过纯化的转化酶也表现出菊粉酶活力,而且菊粉酶的最适温度和与转化酶明显不同。年代后关于菊粉酶的报道也越来越多。近年来尤其在只本、欧洲、美国对产菊粉酶的研究较多“。“我国关于菊粉酶的研究始于年代,主要集中于菌株筛选和酶学性质方面,近几年在分子生物学的研究也日渐趋多“。”啊菊粉是一类天然果聚糖,是由果糖以,卜糖苷键相连,在其还原端连接有一葡萄糖,菊粉酶在适当条件下能把菊粉水解为果糖或低聚果糖,果糖和低聚果糖都是生理功能性较好的糖。工业上利用菊粉酶一步法产高果糖浆或低聚果糖比传统方法工艺更简单、成本更低,所以国内外关于这方面的研究都较多。超高果糖琀,又称高果糖浆,指果糖含量达到%的果糖浆,它是以淀粉为主要原料,运用生物工程技术生产的或利用菊粉酶作用于菊粉生产出来的,以果糖和低聚果糖为主要组份的健康型糖源。在韩、日、台、美、欧等地,已取代了砂糖的传统地位,化学和生理特性“!薄薄薄。=√匦罚僮;赡芰浚蛑嬗诟卧唷K换嵩黾友L侵担茏魑Sざ孕妇、运动员恢复体力的营养源。果糖不需要胰岛素的辅助便可进行正常引言、
代谢,产生能量或合成肝糖元,有助于糖尿病患者、进行重大手术和严重烧伤病人的代谢作用,而且果糖不是口腔微生物的合适底物,因而不易引起蛀牙。此外,果葡糖浆与蜂蜜相似,但蜂蜜中果糖含量不高,且其中的果糖和葡萄糖不易分开,所以其可作为中药成分替