文档介绍：嘉禾五中 李娜
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教学目标:
教学重点:
教学难点:
1、理解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理
2、了解缓冲液的组成及其作用
3、血红蛋白的分离－－样品处理
凝胶色谱法的原理
凝胶色谱法的操作
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一、基础知识――蛋白质提取和分离原理
蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物化理性质：
形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别。
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（一）凝胶色谱法
（1）原理：
（2）材料：
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；
小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。
多孔性的多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。
凝胶
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相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个
B
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（二）缓冲溶液：
2、作用：
能够抵制（ ） 对溶液的（ ）的影响，维持PH 基本不变。
外界的酸或碱
PH值
1、组成：
由弱酸、强碱弱酸盐组成
如:H2CO3/NaHCO3;CH3COONa/CH3COOH，
NaH2PO4/Na2HPO4; KH2PO4/K2HPO4等
3、缓冲溶液的配制:
通常由1-2种缓冲剂溶解于水中配制而成。
思考：说出人体血液中缓冲对。
NaH2PO4 / Na2HPO4
H2CO3 / NaHCO3
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1）原理：
不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
2）影响蛋白质分子运动速度的因素
电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
思考：蛋白质为什么带有电荷？
在一定的PH下，蛋白质可解离的基团会带上电荷
（三）电泳：
3）分类
琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰***凝胶电泳。
测定（ ）通常用 SDS—聚丙稀酰***凝胶电泳
蛋白质相对分子质量
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二、实验操作－－实验步骤
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