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基质金属蛋白酶及其抑制剂在人腹膜间皮细胞中的表达研究
摘要
腹膜透析是治疗慢性肾功能衰竭的重要手段之一,超滤衰竭是阻止
长期腹透顺利进行的主要原因,超滤衰竭的发生多伴有腹膜细胞外基质
的过度积聚及腹膜纤维化的发生。的过度积聚可能是由于促进合成
的一些因素与促进降解的一些因素之间的动态平衡受到破坏引起的。伯
前国内外对腹膜纤维化的发病机制尚不明确。基质金属蛋白酶及其抑制剂
是降解的主要酶系之一。在组织纤维化中的重要
作用正逐渐引起众多学者的关注,系统是否与腹膜纤维化的进展
有关呢目前的的研究尚不明确。尹,
腹膜间皮细胞是腹膜表层主要的细胞群体,直接暴露于高糖高渗等非生物
相容性腹透液的刺激作用下,间皮细胞在调节间皮下的重组方面起重要
作用。研究高糖等非生物相容性因素对人腹膜间皮细胞表达的影
响,探讨可能采取的干预措施,对于深入认识腹膜纤维化的发生机理及其防治
措施具有重要的基础及临床意义。
介腹膜间皮细胞培养方法较多,近年来,很多学者通过胰蛋白酶消化组织
法或直接种植法,利用外科手术取材获得的大网膜组织成功培养出原代人腹膜
间皮细胞。但是,这种方法是一种有创性的检查,并且大部分标本取自普通胃
肠道或肝胆疾病手术病人,而非尿毒症病人,二者腹膜所处的环境有明显
的不同,有学者对这种方法所培养的腹膜间皮细胞是否能够代表病人的腹
膜间皮细胞提出了异议。为了解病人腹膜形态包括腹膜间皮层的变化,不
少学者利用病人腹膜活检的标本获得这方面有益的信息,这种有创性的检
查由于取材过少不能用于腹膜间皮细胞培养,并且难以自由获取尿毒症不同腹
膜透析阶段病人的标本。基于上述认识我们参考国外有关腹透流出液中原代
培养人腹膜间皮细胞的培养方法,尽管这种方法难度较大,我们通过改进,结
果成功建立了腹透流出液中原代培养人腹膜间皮细胞的培养体户们还通过
应用扫描电镜动态观察不同腹透龄培养的腹膜间皮细胞其形态学上的差异,探
求通过这种针对某一具体病人的个体化的培养方法间接地判断腹透病人体内腹
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膜间皮层的实际情况。然后研究了在人腹膜
间皮细胞上的基因及蛋白表达,以及高糖、高渗等非生物相容性因素对上述物
质基因表达的影响,以期阐明在腹膜纤维化进展过程中可能起的
作用。令研究共分两部”,主要内容及结果如下
一、腹透流出液中原代培养人腹膜间皮细胞及其临床意义
利用病人腹透流出液标本,采用离心的方法原代培养人腹膜间皮细胞
并进行传代,利用相差显微镜,免疫组化鉴定,并应用扫描电镜动态观察不同
腹透龄培养的腹膜间皮细胞形态学上的差异。
结果成功地利用腹透流出液原代培养出人腹膜间皮细胞并顺利传代,细胞
汇合后呈多边形,形成铺路石样外观。当培养液中加入后,细胞形态表现
为一种可逆性的成纤维样改变。免疫组化显示培养的间皮细胞胞浆角蛋白及波
形蛋白表达均呈阳性,白细胞抗原表达阴性。扫描电镜动态观察不同腹
透龄培养的间皮细胞,其形态学上存在一定的差异所有培养的间皮细胞几乎
均可见到长短不一的微绒毛,微绒毛形态大多表现为丝状的,也有部分呈球状
表现但腹透龄在一年以上的,所培养的间皮细胞微绒毛最为稀少甚至接近消
失,并且间皮细胞生长缓慢,培养瓶中呈胞体增大的“大间皮细胞”较多。
我们的研究证实从腹透流出液中原代培养人腹膜间皮细胞是一种行之有
效,取材方便,方法简便,重复性高,无创性的培养方法。这种方式培养的腹
膜间皮细胞与利用大网膜培养的腹膜间皮细胞相比,其形态及功能更接近于腹
透病人的腹膜间皮细胞,一定程度上反映病人体内腹膜间皮层的实际情况,
这为体外研究人腹膜间皮细胞的形态及功能及其腹透时的改变提供了必要的物
质基础,并有可能成为临床随访的一个有力工具。
二、人腹膜间皮细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达研究
利用腹透流出液原代培养人腹膜间皮细胞并进行传代,采用、免
疫组化及法检测人腹膜间皮细胞
基因及蛋白表达,并研究高糖高渗对人腹膜间皮细胞上述物质基因表达的影响。
结果显示,人腹膜间皮细胞存在基因及蛋白表达,
未发现明显的表达,葡萄糖显著上调人腹膜间皮细胞基因
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表达高渗对间皮细胞基因表达无明显影响,高糖、高渗对人
腹膜间皮细胞基因表达无明显影响。场检测提示人腹
膜间皮细胞持续分泌并具有降解明胶的功能,金属鳌合剂能够抑
制间皮细胞所分泌的活化洲
我们的研究提示人腹膜间皮细胞能够通过系统影响到腹膜
的降解,高糖可能通过诱导间皮细胞与间表达失衡,在促进
腹膜纤维化的进展上起一定作用。研究生