文档介绍：四川大学
硕士学位论文
青稞中β-1,3-葡聚糖酶分离纯化及性质研究
姓名:丁平
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:杜林方
20030301
青稞中一葡聚糖酶分离纯化及性质研究研究生丁平指导老师杜林方,黄暇厶敲浮綞...嬖谟诖蠖嗍叩戎参镏校⒂梢桓鲂』蚣族编码,在植物不同的生理活动中起着重要的作用。如细胞分裂、小孢子发生、花粉的形成、受精作用和胚的发生,并参与了植物对损伤,低温、臭氧和等做出的生理反应,而且是植物种子发芽和防御反应中的关键物质。青稞是我国青海、西藏特有的高原作物,研究发现青稞种子中含有较高的,、..的,从青稞发芽种子的胚中提纯得到一种,葡聚糖酶,分析了此酶的等电点、最佳反应温度和最佳反应,运用非变性凝胶电泳胶板直接活性染色方法对酶进行了快速鉴定,测定了近紫外和远紫外圆二色光谱,并计算出酶二级结构和三级结果表明:采用上述方法,可以从克发芽青稞种子胚中毫克的,暇厶敲福嗣缚梢蕴匾焖夂4嗵恰T诜潜湫訮臼粲诘パ腔浮>劢沟缬痉治龅鹊点口滴.<钚悦傅鞍住4嗣傅淖钍史从ξ露群头从直鹞。根据谱计算酶的二级结构,表明其含有..螺旋,.%⒓态和浓度相关,其中二价离子的作用大于一价离子,特别是低浓度或可以显著提高酶活。蛋白内源荧光光谱分析也表明,悦傅挠ü夥⑸浞宓挠响较小;而加入”,駼笥ü馇慷认陆导胺⑸浞搴煲疲乙訡影响最大。这可能是金属离子与蛋白质的侧链基团作用,而使酶分子中的生物化学及分子生物学专业酶,但是未有从青稞中提纯暇厶敲傅奈南妆ǖ馈1疚脑擞昧蛩犸С恋怼结构,并结合酶活测定和内源荧光光谱分析,考察了金属离子对酶的影响,并对酶热稳定性和荧光发射光谱变化进行研究。提纯得到只出现一条带。活性染色也在同一位置出现了唯一条亮红色的活性带。甈砻鞔炕傅姆肿恿课
残基的微环境发生了改交。热稳定性实验结果表明,此,黄暇厶酶对热敏感,随温度升高,酶活力下降;内源荧光分析也显示荧光强度增加、最大发射峰蓝移。此酶可能属于热敏感蛋白,与其二级结构中无规则卷曲较多,。关键词:青稞、..葡聚糖酶、活性染色、圆二色光谱、荧光光谱、金属离子
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植物可溶性蛋白的ヒァK怯梢桓残基的酶原前体经过加工而产生,暇厶敲复嬖谟诖蠖嗍闹肿又参镏衒恍└叩戎参锏腂..葡外切.,葡聚糖酶作用于以,糖苷键连接起来的多聚糖的非还原端,切下一个葡萄糖残基,而内切.,暇厶敲敢运婊问阶饔茫缱饔糜物⋯。现今研究较多的是内切酶。根据其等电点、细胞定位、表达模式及序列同源性等特点,可将其分为三种不同类型:嗉钚訠..葡聚糖酶主要存在于健康植物的老叶表皮和根细的,酶原前体中含有诵藕烹募癈端糖基化的液泡导向肽序列,耸且桓残基的疏水性信号肽,而耸且桓谢目赡馨腔罨坏愕碾亩巍酶的成熟过程首先是去除信号肽并加上一个寡糖侧链,接着是糖基化中间反应,类和Ⅱ嗝是酸性分泌性蛋白,位于细胞间隙,,分子量为。例如类的畆琍类的、土街治挥诨ㄖ械糖蛋白蚐俊Q滩葜卸嘀諭酶之间在氨基酸序列上至少存在%的相似性,并和嗝钢辽俅嬖%差异许多植物中的,⒂纱说玫搅硕杂Φ膍聚糖酶已被纯化,编码它们的基因也已经被分离测序并详细研究。,暇耱酶可分为外切一,.】和内切.,黄暇厶敲纤维素的非结区,将其切开,产生大量的非还原端,作为纤维二糖水解酶的底胞液泡中,在体外具有抑菌活性【】。许多高等植物中的目已经被提纯并己测序,发现其是一个单体酶。在烟草中笤嘉诶弦逗透姓失去寡糖侧链并失去┒说难由祀亩味晌R桓龀墒斓拿浮菇╟目猓梅掷氲膍逋夥牒笤咏簧秆〉姆椒ɑ竦昧撕..】。俊
和完整基因序列,其基因的全长为,开放阕读框中第一个可利甩的起始密码子位于第四个核苷酸。它对应的序列为。此序列有两处推中的另一个则从第二个位置加尾。此产生一个由霭被嶙槌傻亩G疤宓鞍缀铣珊笄腥端约笥褻端多肽而成为成熟,,如细胞分裂【”小孢子发生【”、花粉的形成【、受精作用、胚的发生【‘熟【】、禾本科种子胚乳中储藏物质的动用、细胞分化⒉斡肓酥参锒运茸龀龅纳矸从,,黄暇厶敲缚赡芑故侵肿发芽中的关键物质。近年来研究的较多是其对病菌的抑制作用。与几丁质酶一起协同作用时,暇厶敲副硐殖鼋锨康目咕钚裕⒑鸵恍┲参锏姆烙是植物防御真菌入侵体制中的~个主要成分。在发芽过程中,§..薷聚糖酶在胚中被