文档介绍：1/ 4
转基因小鼠筛选一一鼠尾提取基因组DNA方法
.小鼠分笼后打耳标，剪取小鼠尾尖3mm--，标记耳标号。
.配置消化液，,55C,3-5h,或放置过夜。（最长可放置3天）1/ 4
转基因小鼠筛选一一鼠尾提取基因组DNA方法
.小鼠分笼后打耳标，剪取小鼠尾尖3mm--，标记耳标号。
.配置消化液，,55C,3-5h,或放置过夜。（最长可放置3天）。
.加1倍体积（）PCI（F层?体），上下颠倒10余次。（PCI可分装出一些现用，以免操作不慎污染）。
.室温15000rpm离心，10min。
.，依次标号，,上下倒转10次左右。
.4℃，15000rpm离心，5min。
.弃上清，滤纸吸干，加入70%,将管底沉淀弹起，上下颠倒几次，洗涤。
.4℃，15000rpm离心，5--7min。
.弃上清，瞬时离心，用枪吸干剩余液体，后经空气干燥5-10min。
.加入1*TE60-170人一般加100人振荡30min溶解，于4c冰箱保存。
注意事项：
.小鼠耳标与管号一一对应，在剪尾或提取DNA过程中如发生混淆，则应
重新剪尾。
.配置消化液时，最后加蛋白酶K,配置完成后混合均匀再分装；分装后依次检查，确认每管的鼠尾都浸入在消化液中。尽量多配一些消化液，以免不
够。
.提取DNA之前，先检查鼠尾消化情况，过夜消化后，一般只能观察到少量骨骼及鼠尾毛发，如观察到鼠尾组织，说明消化不完全，可能是时间不够或
消化液配置不正确。
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.由于实验中用到的PCI异丙醇等对身体有害，因此在提取DNA和配置
PCI时，应注意防护，戴好口罩和乳胶手套。
.实验过程中，应轻拿轻放，避免液体洒出，沾湿手套，洗去Marker笔字
迹等情况的发生。为了防止耳标号被擦掉，最好连号摆放。
.吸取上清一步中，应保证上清质量，避免下层杂质的吸入，如不慎吸入，
应将样品重新离心。
.DNA沉淀一般呈白色或半透明胶状，混有杂质时可能带有黑色，提取过
程中如观察不到沉淀，应做好标记，重新剪尾。
.DNA样品保存于4c冰箱，保存时应标明剪尾日期，小鼠品系等各项资料，以便查找。
.使用离心机时，离心管尽量分散放。
.吸取挥发有腐蚀性液体时，应用带过滤装置的枪头，以免腐蚀枪。（如
酚、强酸、强碱等。）