文档介绍:转基因小鼠筛选一一鼠尾提取基因组 DNA方法
小鼠分笼后打耳标,剪取小鼠尾尖 3mm--,标记 耳标号。
配置消化液,每管加入消化液 , 55C, 3-5h,或放置过夜。(最长可放 置3天)。
转基因小鼠筛选一一鼠尾提取基因组 DNA方法
小鼠分笼后打耳标,剪取小鼠尾尖 3mm--,标记 耳标号。
配置消化液,每管加入消化液 , 55C, 3-5h,或放置过夜。(最长可放 置3天)。
加1倍体积() PCI(下层液体),上下颠倒10余次。(PCI可分装出一 些现用,以免操作不慎污染)。
室温 15000rpm 离心,10min。
,依次标号,加入异丙醇 ,上下倒转10次 左右。
4°C,15000rpm离心,5min。
弃上清,滤纸吸干,,将管底沉淀弹起,上下颠倒几次, 洗涤。
4C, 15000rpm离心,5--7min 。
弃上清,瞬时离心,用枪吸干剩余液体,后经空气干燥 5-10min。
加入1*TE 60-170卩L 一般加100卩L,振荡30min溶解,于4C冰箱保存。
注意事项:
小鼠耳标与管号一一对应,在剪尾或提取 DNA过程中如发生混淆,则应重新 剪尾。
配置消化液时,最后加蛋白酶 K,配置完成后混合均匀再分装;分装后依次 检查,确认每管的鼠尾都浸入在消化液中。 尽量多配一些消化液,以免不够。
提取DNA之前,先检查鼠尾消化情况,过夜消化后,一般只能观察到少量骨 骼及鼠尾毛发,如观察到鼠尾组织,说明消化不完全,可能是时间不够或消 化液配置不正确。
由于实验中用到的PCI,异丙醇等对身体有害,因此在提取 DNA和配置PCI 时,应注意防护,戴好口罩和乳胶手套。
实验过程中,应轻拿轻放,避免液体洒出,沾湿手套,洗去 Marker笔字迹等
情况的发生。为了防止耳标号被擦掉,最好连号摆放。
吸取上清一步中,应保证上清质量,避免下层杂质的吸入,如不慎吸入,应 将样品重新离心。
DNA沉淀一般呈白色或半透明胶状,混有杂质时可能带有黑色,提取过程中 如观察不到沉淀,应做好标记,重新剪尾。
DNA羊品保存于4C冰箱,保存时应标明剪尾日期,小鼠品系等各项资料,以 便查找。
使用离心机时,离心管尽量分散放。
吸取挥发有腐蚀性液体时,应用带过滤装置的枪头,以免腐蚀枪。(如酚、强 酸、强碱等。)
11 •各管之间应隔开放,以免加液时混淆。
,如酚等。
TE配方: Tris-Hcl mL EDTA