文档介绍：实验七酶联免疫吸附试验
第1页，本讲稿共11页
一、实验目的
掌握酶联免疫吸附实验的操作过程和原理。
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二、实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相
载体表实验七酶联免疫吸附试验
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一、实验目的
掌握酶联免疫吸附实验的操作过程和原理。
第2页，本讲稿共11页
二、实验原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相
载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其
免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗
原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成
的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，
也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量
呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的
量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分
析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达
到很高的敏感度。
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三、实验材料
聚乙烯塑料酶标板（）
抗原：伤寒杆菌O901煮沸或超声波粉碎抗原
待测血清
冻干酶联葡萄球菌A蛋白（HRD—proteinA）纯品
邻苯二***（OPD）
包被液：—
稀释液：10%免疫血清PBS—吐温20，防止非特异性吸附
洗涤液： ,
底物溶液：，，蒸馏水50毫升。临用前新鲜配制，在上述缓冲液中溶解40毫克邻苯二***，然后加入30%，底物对光敏感，需要避光并立即使用。
终止液；2M硫酸
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四、实验步骤
1．抗原包被
　　取洁净的聚苯乙烯微量反应板，于每孔内加伤寒抗原
（用包被缓冲液稀释，蛋白含量10微克/毫升），
置37℃1小时，弃抗原液，用洗涤液3次每次3分钟。
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2．加待测血清
　　于每孔内分别加不同稀释度（如1：5，1：10，1：
20…1：80）的待测血清，PBS空白对照，阴性对照血
清，。置37℃30分钟，洗涤3次。
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3．加酶联A蛋白
　　，置37℃20分钟，洗涤
3次。
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4．加底物溶液
　　，置暗处15分钟。
加2M碳酸1滴终止反应。
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5．测定光吸收
以酶标仪测定492nm处的光吸收。
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五、实验报告
总结ELISA的实验过程。
分析实验结果。
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