文档介绍：HPLC在药物分析中的应用
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HPLC在药物分析中的应用
药品的质量控制
西药、中药
生物样本中药物浓度的测定
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药品的质量控制
药物分析方法的特点
方法的准确性、专属制的样品是否有溶剂峰
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制剂中有关物质检查
首先，对制剂在筛选处方时，应考虑辅料与主药能否配伍，是否影响稳定性，有无干扰质量检测；在制备过程中和贮藏期间是否会使主药降解、聚合或转晶等。由于影响因素较多，因此，对制剂一般应以原料药确立的有关物质检查方法，对其有关物质进行检查研究。
如原料药较稳定，制剂经考察研究亦较稳定者，可考虑该制剂不必再检查有关物质；但有些原料药稳定的药物，经加工制成制剂后，有关物质有增加；或有的原料药本身稳定性较差，对其制剂则均应检查有关物质，并订出限量。
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含量测定方法的建立
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方法验证的项目
专属性
线性
范围
准确度
精密度
检测限 LOD
定量限 LOQ
耐用性
系统适用性试验：理论板数、分离度、对称因子
ICH3-7\
ICH3-7\
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内标法与外标法的选择
原料药及其制剂目前一般选用外标法
生物样本多选用内标法
中药分析视情况而定
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含量测定与有关物质检查的关系
含量测定方法尽可能与有关物质检查方法一致
在严格控制有关物质的前提条件下，含量测定方法可不与有关物质检查方法一致
例..\
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其他问题
含量测定的浓度
操作步骤的简化
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手性药物的分离和测定
HPLC的不可被替代地位
直接法
手性流动相法
手性固定相法
间接法
衍生化法
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例1、氧***沙星对映体的分离
手性流动相法
采用普通的C18柱，
氧***
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例2、那格列奈中有关物质及异构体分析方法的研究
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酒石酸衍生物手性固定相HPLC法拆分那格列奈
其他方法
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色谱条件与系统适用性试验
Kromasil CHI-DMB(250mm×）
流动相:正己烷∶异丙醇∶冰醋酸（95∶5∶）
流速∶，柱温∶20℃
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方法学研究
线性关系考核
回收率试验
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进样精密度试验
检测限
那格列奈中立体异构体及光学异构体杂质的检查
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讨论
流动相体系中适量的异丙醇的加入，可改善峰形，提高分离度，但加入量太多，分离度下降。这是由于手性固定相结构中带有酰***基团、酯羰基和取代苯基，可以与对映体之间产生较强的氢键作用和π-π电子相互作用，其中氢键作用对对映体的分离产生的影响较强。当加入适量异丙醇可使氢键作用达到最佳值，峰形改善分离度提高，但随着流动相中的异丙醇量增大，它与固定相之间产生的氢键作用将抑制对映体与固定相之间的相互作用，从而使对映体的保留减弱，容量因子和分离度同时减小。
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例3
蛋白质类手性固定相HPLC法拆分
[1-乙氧甲酰基-3-苯丙基]-L-丙氨酸
对映体的方法研究
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[1-乙氧甲酰基-3-苯丙基]-L-丙氨酸的结构式
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色谱条件的确立
流动相中缓冲盐类型及浓度对分离的影响
流动相pH值对分离的影响
有机溶剂的加入对分离的影响
柱温对分离的影响
流速对分离的影响
最佳色谱条件
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流动相中缓冲盐类型及浓度对分离的影响
第三十九页，共63页。
流动相pH值对分离的影响
第四十页，共63页。
柱温对分离的影响
第四十一页，共63页。
最佳色谱条件
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样品浓度对分离的影响
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讨论
与通常固定相相比，蛋白质分子尺度大，对硅胶担体的覆盖有限，再加上每一蛋白质分子含有的对映体选择性相互作用点的数目很少，所以其样品的负载量小。
蛋白质手性固定相色谱类似于亲和色谱，对映体与蛋白质通过疏水作用力和库仑作用力相互结合，进行对映体的手性识别。对映体进入色谱柱后先以强的库仑作用力与蛋白质固定相结合，而S-体比R-体结合的更稳定，当蛋白质分子上有限的作用点被完全结