文档介绍：关于酶的固定化
第一张，共七十八张，创建于2022年，星期一
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第一节概述
第二节固定化酶的性质及其影响因素
第三节固定化酶的制备
第四节固定化细胞
第五节固定化辅酶和原生质体
第六节酶反应器和固定化酶（细胞）的
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（5）扩散限制效应
外扩散限制
内扩散限制
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二、固定化后酶性质的变化
1、固定化对酶活性的影响：酶活性下降，反应速度下降
原因：酶结构的变化
空间位阻
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二、固定化酶的性质
固定化对酶稳定性的影响
（1）操作稳定性提高。
（2）贮存稳定性比游离酶大多数提高。
(3 ) 对热稳定性，大多数升高，有些反而降低。
(4 ) 对分解酶的稳定性提高。
（5）对变性剂的耐受力升高。
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2 、固定化后酶稳定性提高的原因：
a. 固定化后酶分子与载体多点连接。
b. 酶活力的释放是缓慢的。
c. 抑制自降解，提高了酶稳定性。
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3、pH的变化
pH对酶活性的影响：
（1）改变酶的空间构象
（2）影响酶的催化基团的解离
（3）影响酶的结合基团的解离
（4）改变底物的解离状态，酶与底物不能结合或结合后不能生成产物。
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pH对固定化酶的影响：
1）载体带负电荷，pH向碱性方向移动;载体带正电荷，pH向酸性方向移动。
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3、pH的变化
2）产物性质对体系pH的影响
催化反应的产物为酸性时，固定化酶的pH值比游离酶的pH值高；反之则低
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4、最适温度变化
一般与游离酶差不多，但有些会有较明显的变化。
5、底物特异性变化
作用于低分子底物的酶特异性没有明显变化
既可作用于低分子底物又可作用于大分子低物的酶
特异性往往会变化。
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6、米氏常数Km的变化，Km值随载体性质变化
（1）载体与底物带相同电荷，Km’>Km固定化酶
降低了酶的亲和力。
（2）载体与底物电荷相反，静电作用，Km‘ < Km
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三．评价固定化酶的指标：
1、酶活定义（IU)：在特定条件下，每一分钟催化一个微摩尔底物转化为产物的酶量定义为1个酶活单位。
1 Kat =1 mol/s = 60 mol/min = 60*106 umol/min
= 6*106 IU
2. 酶比活定义（游离）：每毫克酶蛋白或酶RNA（DNA)所具有的酶活力单位
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三、评价固定化酶的指标：
3、
4、
酶结合效率，又称为酶结合率，是指酶与载体结合的百分率。
酶活力回收率是指固定化酶的总活力与用于固定化的总酶活力的百分率。
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5、相对酶活力：具有相同酶蛋白（或RNA）量的固定化酶活力与游离酶活力的比值称为相对酶活力。
6、固定化酶的操作半衰期：在连续测定条件下，固定化酶的活力下降为最初活力一半所经历的连续工作的时间。
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四、固定化酶的活力测定方法介绍
1、间歇测定：在搅拌或震荡反应中，在与溶液酶相同测定条件下进行，然后间隔一段时间取样，过滤后按常规方法测定产物生成量或底物的消耗量。
此法操作简单。
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四、固定化酶的活力测定方法介绍
2、连续测定法
利用连续分光光度法等测定方法可以对固定化酶反应液进行连续测定，从而测定固定化酶的酶活力。
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总结：固定化酶的性质及其影响因素提要
影响固定化酶性质的因素
固定化酶的性质
评价固定化酶的指标
酶本身的变化
载体的影响
固定化对酶活性的影响
固定化对酶稳定性的影响
最适pH的变化
最适温度变化
底物特异性与游离酶不同
米氏常数Km的变化
评价指标