文档介绍：中国农业科学院学位论文时转染系统的构建隐孢子虫间接锒戏椒ḿ疤迥谒论文编号:硕士研究生:张国恩指导教师:陈兆国研究员申请学位类别:农学硕士专业:预防兽医学’研究方向:动物寄生虫及其分子生物学培养单位:上海兽医研究所研究生院提交日期月密级:痭
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研究生签名::%,习/囝,时间:枷,,年/月,乡日导师签名:徭.:謋珏时间:加悔/月,乡日独创性声明关于论文使用授权的声明时间:加年拢日C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定,即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
摘要隐孢子虫病且咦映感染动物和人引起的一种寄生虫病,以自限性水样腹泻为主要症状。隐孢子虫能感染嘀侄铮渲胁溉槎镏辽有种。隐孢子虫卵囊在环境中普遍存在,人类可以通过多种途径获得感染。但目前隐孢子虫病还没有特效的治疗药物,因而对其进行检测与预防很重要。本实验利用酶切法从重组质粒甌中获得隐孢子虫鼠基因型基因,克隆至靥澹菇ㄖ刈樵吮泶镏柿甈。。结果发现可分别与兔隐孢子虫感染兔阳性血清、贝氏隐孢子虫感染鸡阳性血清、微小隐孢子虫感染牛阳性血清、隐孢子虫鼠基因型感染鼠阳性血清特异性反应,而不与兔、鸡、牛、鼠阴性血清反应,表明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。以纯化的重组蛋白为抗原,建立隐孢子虫间接觳夥椒ǎ云涿舾行浴⑻匾煨和重复性进行观察;利用建立的方法,对临床血清样品进行检测。结果成功地建立了隐孢子虫间接觳饧际酰渥钍士乖慌ǘ任/,血清最佳稀释倍数为,酶标二抗最佳稀释倍数为哂辛己玫奶匾煨浴⒚舾行院椭馗葱浴@媒⒌膔瓻检测方法,对份临床血清样品进行了检测,并与崽瞧》āḿ觳饨峁斜冉稀结果显示,、特异性强,重复性好、价格低廉、操作简单、,为研制隐孢子虫病觳馐约梁写蛳铝嘶为建立微小隐孢子虫体外感染模型,并对其在细胞内的生长发育过程进行观察,利用人回盲肠癌细胞细胞魑8腥鞠赴捎貌煌慕又窒赴ǘ群团嘌G迮ǘ冉信嘌=果,在着嘌逯薪又謑××’、鱿赴螅、蟪こ%单细胞层,可以用来接种个微小隐孢子虫。用含有パG迮ǘ鹊呐嘌磁嘌⑿∫咦虫,培养螅ü鼵和瓽抗体荧光染色,成功观察到了隐孢子虫各个阶段虫体的形态。为探索绿色荧光蛋白在隐孢子虫中的瞬时表达情况,分别扩增了微小隐孢子虫自身蛋白子孢子表面抗原、热激蛋白、组蛋白、肌动蛋白、微管素蛋白和傅钠动子序列,并将外源蛋白基因置于其启动子中,共构建了个穿梭转染质粒。通过电转染导入微小隐孢子卵囊中,培养螅昧魇较赴恰⒂ü庀晕⒕岛蚏觳釫泶情况。结果和两个质粒转染组流式细胞仪和荧光显微镜检测均观察到荧光,检测扩增出了特异性条带,表明本研究建立了隐孢子虫体内瞬时转染系统,可以在隐孢子虫体内表达绿色荧光。为下一步稳定表达外源蛋白打下了基础。关键词:隐孢子虫,,间接赴嘌迥谒彩弊H鞠低
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