文档介绍：实时荧光定量 PCR 仪
一、仪器照片

二、仪器设备概况
1. 仪器简介:
Thermo Scientific Pikoreal 是一款小巧,快速,能同时进行多重 DNA 检测的实时荧光定
量 PCR 系统。广泛用于科研,临床研究及诊断,食品检验,法医鉴定等领域。设计小巧,
反应速度快,灵敏度高。具有绝对定量,相对定量,溶解曲线分析,等位基因检测分析功能,
是一款性能优越,并能成倍节省实验成本的高性价比荧光定量 PCR 系统。
2. 性能参数:
1)PCR 模块
模块类型: 24 孔 or 96 孔
样品容量: 5 – 50 μl (24 孔), 5 – 20 μl (96 孔)
平均升温速率: >5°C/sec
平均降温速率: > °C/sec
温控范围: 4 – °C
温度精确性: ±°C
温度均一性: ±°C (95°C 时 1 秒内达到)
温度控制范围: 30 – 110°C

2)光学检测系统
激发光源: 5个 LED,5 个激发光滤光片
激发波长范围: 475 – 640 nm
探测器: D
探测波长范围: 520 – 740 nm
预先校正染料: FAM, SYBR Green, HEX, Yakima Yellow,ROX, Texas Red,Cy 5
预先校正染料: 选配
线性范围: 10 个数量级
检测灵敏度: 单拷贝
3. 应用范围:
进行多重 DNA 检测的实时荧光定量 PCR 系统。广泛用于科研,临床研究及诊断,食
品检验,法医鉴定等领域
4. 面向学科
生物工程、制药工程
5. 联系人
任杰
6. 联系电话
63155

三、仪器设备使用说明和操作规程
1)PCR 体系(总体积 20μl) H2O 适量 10×PCR buffer 2μl
dNTP mix ( ) 2μl primer1(10pmol/μl) 2μl primer2(10pmol/μl) 2μl
Taq 酶 1-2U
Template 1ul(质粒 10ng 足够,不要超过 1ug)
2)加样顺序依上述体系从上至下顺序,加模板时用带滤芯的枪头。操作时要加一次样,将
EP 管在管架上移动一格。已加材料的管放在另外一个架子上,这样可以预防重复加样或漏
加样的错误。样品加完后盖上管盖,轻弹管壁混匀,瞬时离心。混匀也可用枪和带滤芯的枪
头缓慢混匀。
3)PCR 反应条件
一般条件:94℃5min-- (94℃30s 55℃30s 72℃30s-1min)20-30 次循环-- 72℃7min-- 4
℃ 5min
如果按照上述条件没有得到应有产物,那么可以采用梯度 PCR(Tm 可以从 40-70℃)
摸索适当的退火温度、并适当延长退火温度。
①变性温度与时间:一般情况下,93℃~94℃,lmin 足以使模板 DNA 变性,若低于

93℃
则需延长时间,但温度不能过高,因为高温环境对酶的活性有影响。
②退火(复性)温度与时间:退火温度是影响 PC