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专利名称:带鱼多肽的制备方法
技术领域:
本发明涉及生物技术领域,具体是指一种以带鱼为原料,通过酶水解带鱼蛋白质,制备多肽的方法。
背景技术:
带鱼又***鱼,是我国沿海产量较高的一种经济鱼类,它不仅肉嫩体肥、味道鲜美,并具有较高的药用、食疗价值。带鱼蛋白质是一种全价蛋白质,含有人体必需的八种氨基酸;还含有钙、铁、磷、镁、锌、硒等微量元素以及多种维生素,营养丰富,深受国内外消费者的青睐。
目前,带鱼的食用方法单一,主要是直接食用。由于带鱼蛋白质是大分子物质,不能被人体直接吸收和利用,而低分子肽等活性物质没有完全游离出来,降低了带鱼的保健功效。低分子肽通常只由2—10个氨基酸残基组成,较氨基酸更易为人体所吸收,且具有某些特殊的生理活性如抗菌、抗氧化、抗肿瘤等。并且,随着捕捞强度的增大,
海洋捕捞的小带鱼产量呈逐年上升趋势;小带鱼由于体型小,直接食用的价值较低;现在主要用来生产鱼粉等低值产品,更有作为废弃物直接丢弃,导致资源未得到充分利用,经济效益低下,甚至污染环境。
经检索,国内已有人采用酶法水解鱼蛋白质制备多肽,如中国专利申请号为
、发明名称为"一种海产小杂鱼提取物的制备方法",它公开了以海产小杂鱼为原料提取多肽混合物制品的方法。该方法使用一种酶(木瓜蛋白酶)进行海产小杂鱼蛋白质的水解,其美中不足是,由于仅采用一种酶水解蛋白质,并且在水解过程中,也没有采取措施保持酶解液的pH在该种酶的最适pH,而氨基酸中羧基的解离度远远大于氨基的解离度,会引起酶解液的pH降低,从而影响酶的活性,导致蛋白质水解不彻底,得到的多肽产品的分子量较大,即90%以上多肽的分子量在2000Da~8000Da之间,其多肽的营养保健效果不理想。
发明内容
本发明要解决的技术问题是,提供一种能提高蛋白质的水解效率,所得低分子肽含量高的带鱼多肽的制备方法。
本发明的方法包括以下步骤(1)将带鱼洗净称重,加入13倍带鱼质量的水,绞碎成均匀的鱼肉浆;
(2)将鱼肉浆放入酶解罐中,升温至4565'C,,以带鱼质量计,%%的内切蛋白酶,%%的天然抑菌剂即乳酸链球菌素(Nisin),搅拌水解1624h;%%的外切蛋白酶,调节温度至45-60'C,,继续搅拌水解36h;
(3)搅拌水解结束后,升温至9095。C,保持1520分钟灭酶;
(4)将上述反应完毕的水解液离心,4000rpm,1520分钟,取上清液;
(5)将上清液减压浓縮至原体积的1/101/5,温度50'C,,得到带鱼多肽产品。
在步骤(2)的酶解过程中,首先,根据添加的每种内切蛋白酶的最适温度和最适pH,通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器,用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法,自动控制温度和pH保持在每种内切蛋白酶的最适值;然后,根据添加的每种外切蛋白酶的最适温度和最适pH,通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器,用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法,自动控制温度和pH保持在每种外切蛋白酶的最适值。
所述内切蛋白酶为木瓜蛋白酶、Neutrase或Alcalase;外切蛋白酶为Flavourzyme、
氨肽酶或羧肽酶。
在步骤(4)和步骤(5)之间可加入脱色步骤在上清液中加入1%3%的活性碳粉末,搅拌l2h,过滤或抽滤。
本发明带鱼多肽的制备方法与现有技术相比,具有以下显著优点和有益效果
由于本发明先使用内切蛋白酶水解,再使用外切蛋白酶水解,并在水解过程中添加乳酸链球菌素抑制水解液的变质,以及采用搅拌的方法有助于蛋白酶与底物的充分接触和产物的扩散。内切蛋白酶先将蛋白质水解为分子量较大的多肽,然后再使用外切蛋
白酶进一步水解,由于内切蛋白酶和外切蛋白酶的作用位点不同,导致蛋白质水解更彻底,所得带鱼多肽的分子量范围保持在250Da6000Da之间;其中分子量小于1000Da的多肽含量高于50%,即低分子肽含量高,带鱼多肽营养保健效果比较理想。
又由于本发明在整个水解过程中,根据添加的每种内切蛋白酶和外切蛋白酶的最适温度和最适pH,通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器,用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法,自动控制温度、pH保持在最适值,最大限度发挥了蛋白酶的活性,提高了蛋白质的水解效率,使蛋白质水解更加彻底,进一步保证了使带鱼多肽
的分子量范围保持在250Da6000Da之间、分子量小于1000Da的多肽含量高于50%的突出的技术效果。
本发明带鱼多肽的制备方法工艺简便,生产周期短。其带鱼多肽产品可广泛用于保健食品、营养补充剂及化妆品等的功能配料,为带鱼深加工生产高附加值产品提供了一条新的途径。
具体实施例方式
下面给出3个优选实施例,但本发明不仅局限于以下实施例。
实施例1
将带鱼洗净,,***,绞碎成均匀的鱼肉浆;将鱼肉浆放
入酶解罐中,升温至55°C,,以带鱼质量计,%%Nisin,100rpm搅拌水解22h,%氨肽酶,调节温度至60'C,,继续水解3h,然后升温至95t:,保持15分钟灭酶。将水解液离心,4000rpm,15分钟,取上清液。在上清液中加入1%的活性碳粉末,搅拌lh,抽滤。将滤液减压浓縮至原体积的1/10,温度50℃,,得到带鱼多肽产品。采用SphadexG-75凝胶过滤层析,测定带鱼多肽产品的相对分子质量带鱼多肽的分子量范围为250Da6000Da;其中分子量小于1000Da的低分子肽含量高于50%。
实施例2:
将带鱼洗净,,***,绞碎成均匀的鱼肉桨;将鱼肉浆放入酶解罐中,升温至5CTC,,以带鱼质量计,%%Nisin,100rpm搅拌水解18h,%羧肽酶,调节温度至55'C,,继续水解5h,然后升温至90℃,保持18分钟灭酶。将水解液离心,4000ipm,15分钟,取上清液。在上清液中加入3%的活性碳粉末,,抽滤。将滤液减压浓縮至原体积的1/9,温度50°C,,得到带鱼多肽产品。采用SphadexG-75凝胶过滤层析,测定带鱼多肽产品的相对分子质量带鱼多肽的分子量范围为
250Da6000Da;其中分子量小于lOOODa的低分子肽含量高于50%。
实施例3:
将带鱼洗净,称取lkg带鱼,***,绞碎成均匀的鱼肉浆;将鱼肉浆放入酶解罐中,升温至60℃,,以带鱼质量计,%%Nisin,100rpm搅拌水解24h,%Flavourzyme,调节温度至50℃,,继续水解6h,然后升温至95'C,保持20分钟灭酶。将水解液离心,4000rpm,15分钟,取上清液。在上清液中加入2%的活性碳粉末,搅拌2h,抽滤。将滤液减压浓縮至原体积的1/8,温度50'C,,得到带鱼多肽产品。采用SphadexG-75凝胶过滤层析,测定带鱼多肽产品的相对分子质量带鱼多肽的分子量范围为250Da6000Da;其中分子量小于1000Da的低分子肽含量高于50%。
权利要求
1、一种带鱼多肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤(1)将带鱼洗净称重,加入1~3倍带鱼质量的水,绞碎成均匀的鱼肉浆;(2)将鱼肉浆放入酶解罐中,升温至45~65℃,~,以带鱼质量计,%~%的内切蛋白酶,%~%的乳酸链球菌素,搅拌水解16~24h;%~%的外切蛋白酶,调节温度至
45-60℃,~,继续搅拌水解3~6h;(3)搅拌水解结束后,升温至90~95℃,保持15~20分钟灭酶;(4)将上述反应完毕的水解液离心,4000rpm,15~20分钟,取上清液;(5)将上清液减压浓缩至原体积的1/10~1/5,温度50℃,~48h,得到带鱼多肽产品。
2、根据权利要求1所述的方法,其特征在于在步骤(2)的酶解过程中,首先,根据添加的每种内切蛋白酶的最适温度和最适pH,通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器,用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法,自动控制温度和pH保持在每种内切蛋白酶的最适值;然后,根据添加的每种外切蛋白酶的最适温度和最适pH,通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器,用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法,自动控制温度和pH保持在每种外切蛋白酶的最适值。
3、根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述内切蛋白酶为木瓜蛋白酶、Neutrase或Alcalase;夕卜切蛋白酶为Flavourzyme、氨月太酶或羧月太酶。
4、根据权利要求1所述的方法,其特征在于在步骤(4)和步骤(5)之间可加入脱色步骤在上清液中加入1%3%的活性碳粉末,搅拌l2h,过滤或抽滤。
全文摘要
本发明涉及一种带鱼多肽的制备方法,包括如下步骤(1)将带鱼加入1~3倍带鱼质量的水绞碎成均匀的鱼肉浆;(2)将鱼肉浆放入酶解罐中,升温至45~65℃,~,以带鱼质量计,%~%的内切蛋白酶,%~%的乳酸链球菌素,搅拌水解16~24h;%~%的外切蛋白酶,调温至45-60℃,~,继续搅拌水解3~6h;(3)灭酶;(4)离心,取上清液;(5)将上清液减压浓缩真空干燥得带鱼多肽产品。该方法制得的带鱼多肽的分子量范围保持在250Da~6000Da之间;分子量小于1000Da的多肽含量高于50%。