文档介绍：土壤生物化学指标测定
一、土壤脱氢酶（dehydrogenase）活性测定（比色法）
（一）分析意义脱氢酶能酶促脱氢反映，它起着氢的中间传递题的作用。在土壤中，碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，他们可以作为氢的工体。脱氢酶能稳定的蓝色络合物，以碘的体积表示酶的活性。此法要注意保证反应所需要的酸度，对碱性土壤应加过量的酸，才易于判断滴定终点。
3、测压法：本法用Warburg呼吸器，测定在多酚氧化酶作用下消耗用于氧化多酚化合物的氧量，表示酶活性。此法要求仪器设备，且测定样品所需要时间较长。测定多酚氧化酶常用的基质有邻苯二酚和邻***，由于测定多分氧化酶是基于测定加入土壤的多酚的演化速度，一般邻***氧化得最快，故常用邻***为基质，以比色法进行测定。
（三）试剂配置
1 、 1%邻***溶液
2、***
3、
4、 ***钾标准溶液： K2Cr2O7 （优级纯） HCl（相当于50ml醚中含
5mg紫色没食子素）
5、： H2O （分子量=, ） 9ml 与（分子量=, ）11ml 混合而成。
（四）实验步骤
1、标准曲线的绘制：取 0、1、3、5、7、9、11、13ml ***钾标准溶液于 50ml 比色管中， HC1补足至35ml制成相当于含汗0、100、300、500、700、900、 1100、 1300ug 没食子素的系列溶液，在分光光度计上于 430nm 处闭塞测定，制作标准曲线。
2、操作过程：取1g新鲜土样，置于100ml小口三角瓶中，磷酸缓冲液，然后加入10ml 1%邻***溶液，摇荡三角瓶后盖上橡胶瓶塞，并放在30 0C恒温箱中培养2h。培养结束后，加入35ml***，在恒温振荡器上振荡15 分钟（25oC）,静置5分钟。最后，将含有溶解的紫色没食子素的着色***相在430nm 处进行比色。为防止因***引起的误差，每比色一次用无水乙醇洗涤比色槽一次。
为了削除土壤中原油的醚溶性有机物质引起的误差及校正没食子酚的纯度，需设无土基质土壤对照和无土壤的及基质作对照，无基质的对照用水来代替。
3、结果计算：多酚氧化酶活性=没食子素含量/1g — 土壤含水量
多酚氧化酶活性，以2 h后1g干土紫色没食子素的含量表示。
四、土壤过氧化物酶（peroxidase）活性的测定（比色法）
（一）分析意义过氧化物能氧化土壤有机质。一些过氧化物是土壤微生物生命活动的结果，也与某些氧化酶（如尿酸盐氧化酶）的作用有关，所以与多酚氧化酶一样，过氧化物在腐殖质的形成过程中具有重要的作用。
（二）方法选择及原理过氧化物酶是一种含**铁的氧化酶，它按照下面两步与过氧化氢起反应：
过氧化物 “氧化剂” 此步在过氧化氢酶催化下进行。
“氧化剂” +dh2——过氧化物酶+h2o+d 第一步是颇有选择性的、仅有氢、***化的过氧化氢与乙基过氧化物才能与这种酶结合，从而生成活泼的酶-----基质氧化物，然后此“氧化剂”再与还原型化合物dh2）反应，而完成这一酶促反应