文档介绍：实验一农杆菌感受态细胞的制备[目的及要求]了解和掌握农杆菌感受态细胞制备的原理和方法。[实验原理]在利用根癌农杆菌介导的基因转化中,首先要获得含有目的基因的农杆菌工程菌株。在基因工程操作中,感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。农杆菌的感受态可用CaCl2处理而诱导产生。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl2溶液中,0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变,此时的细胞呈现出感受态。制备好的农杆菌感受态细胞迅速冷冻于-70℃可保存相当一段时间而不会对其转化效率有太大的影响。[实验仪器、材料和试剂]一、仪器:超净工作台,恒温摇床,冷冻高速离心机,高压灭菌锅,冰箱,-70℃超低温冰柜,分光光度计,接种针,10ml试管,50ml离心管,,冰浴,微量进样器及吸头。以上玻璃仪器和离心管需在用前灭菌,灭菌条件:120℃,15分钟。二、材料:土壤农杆菌LBA4404菌株或其它农杆菌菌株三、试剂:YEB液体培养基(1L):酵母提取物1g,牛肉膏5g,蛋白胨5g,蔗糖5g,MgSO4·,,高压灭菌。利福平(Rif)储液:50mg/ml20mMCaCl2,高压灭菌。[实验步骤]1、挑取根癌农杆菌LBA4404单菌落于3ml的YEB液体培养基(含