文档介绍：膃螁膂盐酸萘乙二***分光光度法测定肉制品中的亚***盐薀蝿肁姓名:班级:食品科学袄螄袇学号:薀袆莇一目的要求蚆薂袄1通过实验强化对紫外—可见分光光度法定量分析原理的理解;蚀芆螀2了解以紫外—可见分光光度法为基础的检测方法的建立思路;肄莁袇3直观了解紫外—可见分光光度计的结构;螀蚇螈4掌握紫外-可见吸收光谱的测定方法;螆膀节5掌握利用标准曲线法进行定量分析的方法。袀肈袃二实验原理芄膃羇亚***盐在食品生产中用作发色剂和防腐剂,允许用于肉及肉制品的生产加工中,使得肉与肉制品呈现良好的色泽。其呈色机理是,亚***盐与肌肉中的乳酸作用产生亚***,而亚***不稳定易分解产生一氧化氮,然后一氧化氮与肌红蛋白结合产生红色的亚硝基肌红蛋白,使肉制品产生稳定的红色。但是过量的亚***盐能够引起高铁血红蛋白症,导致组织缺氧,还可使血管扩张、血压降低。罿芅羅在酸性条件下,亚***盐可与对氨基苯磺酸通过重氮化反应定量生成重氮盐,该重氮盐可进一步与盐酸萘乙二***通过偶联反应生成紫红色偶氮染料,在特定波长处产生较强吸收:羆羂羄聿蚆薂;蒄蚁肇腿肇莆通过测定该偶氮染料在特定波长下的吸光度,利用朗伯-比尔定律(A=KLc)可确定样品中亚***盐的质量浓度。膆螄螆采用标准曲线法进行定量分析时,可对亚***盐标准溶液系列进行上述反应,通过测定该系列的吸光度,利用excel回归标准曲线,得到浓度和吸光度的关系,再将样品中亚***盐测得的吸光值带到方程中算出其中亚***盐的浓度。腿蒈莁三仪器与试剂薃蒃***1仪器艿衿螇CaryEclipse型紫外-可见分光光度计;BS124S电子分析天平。芅芁膃2试剂荿羅腿亚铁***化钾[)6·3H2O]、乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]、硼砂[Na2B4O7·10H2O]、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二***,均为分析纯试剂。螃肀芇四实验步骤葿莆***1试剂配制蒅肃袅亚铁***化钾溶液:***化钾,溶解于水后稀释至1000mL。蕿螇膂乙酸锌溶液:,加30mL冰乙酸溶于水,稀释至1000mL。羃袂莇饱和硼砂溶液:,溶解于100mL热水中,冷却后备用。蚈膈芄对氨基苯磺酸溶液:,溶解于100mL20%的盐酸中,置棕色瓶中摇匀,避光保存,其浓度为4g/L。蚅薁莃盐酸萘乙二***溶液:***,溶解于100mL水中,,混匀后置棕色瓶中,避光保存,其浓度为2g/L。蚈蕿羁亚***钠标准储备溶液:***钠,用蒸馏水溶解移入500mL容量瓶中,稀释至刻度,混匀。此溶液亚***钠含量为200μg/mL。肃蚄蒇亚***钠标准使用液:临用前吸取亚***,加水稀释至刻度,此溶液亚***。螈螆蚅2标准溶液系列和样品制备袅莃肅标准溶液系列制备:吸取亚***钠标准使用液0、、5、10、15、20、25mL于50mL具塞比色管中,分别加入2mL对氨基苯磺酸溶液,混匀后静置3~5min,再分别加入1mL盐酸萘乙二***溶液,加水至刻度,混匀静置15min后测定,制成的标准溶液浓度系列为0、、1、2、3、4、5μg/mL。袈***蚀样品制备:,将其置于50mL烧杯中,,搅拌均匀,用约300mL70℃左右的水将样品转移入500mL容量瓶中,置沸水浴中加热15min后,取出冷却至室温,然后边转动边加入5mL亚铁***化钾溶液,摇匀后再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质,加水至刻度,混匀(),,除去上层脂肪后将清液用滤纸过滤,弃去初滤液约30mL,收集滤液备用。吸取40mL滤液于50mL具塞比色管中,加入2mL对氨基苯磺酸溶液,混匀后静置3~5min,再加入1mL盐酸萘乙二***溶液,加水至刻度,混匀静置15min后测定()。薇膂螀3测定羈薈肆用1cm吸收池,对显色后的标准溶液系列最高浓度的溶液进行300-700nm范围内紫外—可见吸收光谱扫描,并从该光谱中确定最大吸收峰的波长。羄羀薃用1cm吸收池,以空白调节零点,于特定波长下测定标准溶液系列的吸光度峰值,每个标准溶液重复测定3次,记录吸光度数据;用同样条件测定样品溶液的吸光度,每个样品重复3次,记录样品吸光度数据。肈羈螃4实验结束后,按要求关好仪器。蚆羃袀五结果处理(见后面)膈肅蒇1对记录的标准溶液系列中的每一个标准溶液的3次吸光度求平均值,对该系列的吸光度平均值和浓度值进行线性回归,获得标准曲线方程A=a+bC中的a和b。该项工作亦可利用仪器的功能在仪器上完成。膄螂芅2对测定的样品溶液的3次吸光度求平均值,将该值代入A=a+bC中,得到样品的结果,根据样品的取样量计