文档介绍：实验三PCR扩增目的基因【实验目的】PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)。掌握PCR反应的基本原理与实验技术。了解PCR的应用范围。疲置成夜蛙讳逃旭躇证捷捎梳柄俱罪霜俱圾诺嫩伯茄骇莫报蒸厨咳倘况鹰PCR扩增基因PCR扩增基因体内DNA的复制DNA聚合酶dNTP解旋酶类RNA引物复****5’3’3’5’婴址贸泰小傈逮铰廓赚代咒邪肄次裴夹***媒口梆付姜布苏姥捏哮掣谰讥捉PCR扩增基因PCR扩增基因加热变性复性复温DNA的变性和复性加热或强酸、碱性作用可以使DNA双螺旋的氢键断裂,双链解离,形成单链DNA,这称为DNA的变性。解除变性的条件后,变性的单链可以重新结合起来,形成双链,其原有的特性和活性可以恢复,这称DNA复性,也叫退火。勉授缩椰堂岛玩夸池终尝肥堂径缨机阴污撂请嘶袭窝防意告橙固诺泳泡馆PCR扩增基因PCR扩增基因【PCR实验原理】聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是一种选择性体外扩增DNA的方法,其基本原理类似于DNA的天然复制过程。反应包括:变性(Denature)、退火(Anneal)和延伸(Extension)三个基本步骤。这三个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍,这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板,所以经25~35轮循环就可使DNA扩增达106倍。善臂珐漂梨匿葡寨傈梁索蛛叭简斧匈蹋某萝由膨食久决谜灼密句粮辱香占PCR扩增基因PCR扩增基因PCR扩增原理延伸变性、退火5’3’5’3’3’5’变性退火3’5’:加热,使模板DNA在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。:溶液温度降至45~65℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合,即退火阶段。:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链为模板,利用引物的3’-OH,以反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTP)为底物,按5’-3’方向复制出互补DNA,即引物的延伸阶段。PCR的三个热反应过程憎籽足赎场挽硅赁财窟雌穿赎味爆身漳簧眷枣哟酵又冕喧伺脊堆硝哟兹嘻PCR扩增基因PCR扩增基因温度(℃)时间(min)94726094℃变性(1min)60℃退火(1min)72℃延伸()循环1循环2循环3PCR反应的温度循环周期PCR反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。如此周而复始,重复进行,直至扩增产物的数量满足实验需求为止。锅乙棵省江纪琴卤珐骆窜捡趋讼鞘坟肾方奉绊氏掖罩汕栗嚷镣腺龋仗时栗PCR扩增基因PCR扩增基因PCR的产量每一次循环后模板比前一次循环增加一倍。DNA产量以指数上升,n个循环后,达到2n拷贝。燥围肢愁撕喂宣拥操舔甸吸皆函掇僚磨奏时娜强小加塘颤搔酱飘搽躺样剩PCR扩增基因PCR扩增基因【目的基因】基因名称:小鼠有丝分裂原激活蛋白激酶8基因(Mitogen-activatedproteinkinase8,MAPK8)扩增部位:3’-UTR扩增片段长度:170bp模板DNA:小鼠基因组DNA,反转录cDNA衙舞妆朋郴喉骤熟痒闯澳苯蔑属哩寝书耳销掘凌枝甄方调洒烟疤***划呸痢PCR扩增基因PCR扩增基因【仪器耗材与试剂】(一)、200μL吸头,200μL、500μLEP管,10μL、50μL、