文档介绍：天津医科大学
硕士学位论文
p100蛋白及其片段重组质粒的构建与表达
姓名:陆燕欣
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:杨洁
20090501
中文摘要目的分别将人类基因,的基因片段和味ㄏ蛄方法直鹄┰龀鰌ǔぃ瑂魏蚑片段基因的序列,定向克隆结果结论关键词:人类蛋白;重组质粒;融合蛋白;蓝白斑筛选一步研究蛋白及其片段的定位、功能及与其它蛋白的相互关系奠定实验基①ɑ竦胮蛐蛄校ざ任琒蚱蚱;②将全长与载体分别进行双酶切得到相应的片段,并连接获得重组质粒。将其进行双酶切鉴定可见片段。③;全长、片段、瓹柿#顾强捎牒焐ü獾鞍自贖赴谌诤媳泶铮佣=础。至真核表达载体瓹菇ㄏ嘤Φ种重组质粒。将构建成功的质粒转染入细胞,荧光显微镜下可观察红色荧光融合蛋白表达。过蓝白斑筛选后的重组子经双酶切再与靥辶踊竦弥刈橹柿#嗤荧光蛋白的分布及表达情况。段均可与红色荧光蛋白在细胞中融合表达。天津医科大学硕士学位论文.
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啪符号说明疭达尔伯克改良伊岷Ⅺ鞍桌野彼峒信号传导与转录激産环磷酸腺苷效应元缩略词英文全称中文译名病毒细胞核抗原多克隆位点格尔培养基胺苄西林聚合酶链反应酶活因子转录激活区件结合蛋白组蛋白乙酰转移酶猟庑窤盏嫉某聊合物运动神经元生存蛋白多囊肾病天津医科大学硕士学位论文.’’瓾’
学位论文储虢晔日渺/净归用作者签名:晔胁薮跄晟玖导师签名:蹬倘掌冢嚎年鲁口,在——年解密后适用本授权书。学位论文原创性声明学位论文版权使用授权书不保密圈。本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外,论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文,并编入有关数据库。保密本论文属于朐谝陨戏娇蚰诖颉啊獭
肴樘擒彰浮⒂ü馑孛浮⒎置谛图钚粤姿崦⒂ü獾它可在ψ孕蟹⑸渎躺ü猓扌韪ㄖ蜃雍偷孜铩最大的优势是无需损伤细胞即可研究细胞内事件。而本实验所采用的载体为带有红色荧光蛋对的结构和功能特点进行研究,他们发现人类蛋白包括鲋馗吹挠肫种小的依赖的酶,可水解单链或双链蚏的姿岫ゼ刖罱我们知道,重组质粒构建与表达是常用的分子生物学手段,即将目的基因插入表达载体的多克隆位点使之成为重组子并能够在细胞中稳定表达。而载体又根据其报告基因的不同分为很多种,其中常见的报告基因有:氯霉素乙酰基转移酶白家族等。其中荧光蛋白家族中的绿色荧光蛋是应用最多的发光蛋白,白的载体,即瓹F溆ü獾鞍资谴佑L抑刑岽砍隼吹摹K隚仅在报告基因上不同,并不改变载体的读码框架,因此可以参照瓹闹柿图谱进行实验。因为分子量为而得名。。。广泛存在于多种组织和细胞中。蛋白在分泌期乳腺胞浆中、小鼠脂肪细胞以及肝脏的内质网中均有发现。免疫荧光镜证实了这些细胞的非核区猵鞍椎拇嬖凇牛乳腺胁糠中蛄蟹治鼋峁允酒溆肴死鄍癐刍序列有高度的同源性。人工合成的人序列的抗体验证了在牛、小鼠、大鼠的细胞中蛋白的存在【A碛斜ǖ涝谥参铮缤愣购湍饽辖婺诜⑾謕鞍住R虼藀蛋白应当在细胞内承担重要作用。蛋白的氨基酸序列与其它已知的转录共激活因子无相似性。有人运用,疏水簇分析萄球菌核酸酶具有同源性的片段组成的片段,以及随后的一个。与蛋白结构域相似的葡萄球菌核酸酶又称为耐热核酸酶,它是一ズ塑账岷投嗪塑账帷】。此酶的氨基酸序列中存在着两个活化位点,它们参与核酸酶的催化机制。的结构域没有这些序列,因此最初推测蛋白可能没有催化活性,也可能因此限制了其与岷系哪芰ΑH欢婧蟮难芯发现的中核酸酶的第一个亚结构域霭被有折叠结构天津医科人学硕士学位论文,
溯队Ⅲ洲,寡聚核苷,寡聚糖结合折叠折叠结构是~种新的普遍结构,像其他折叠结构一样它适合于大多数蛋白序列,并且提供了与折叠相关的结合位点,其结合位点以及配体类型取决于折叠结构和拓扑类型而不是蛋白序列。另外折叠常见于那些可以结合寡聚核昔酸或寡聚糖的蛋白中,这一家族在三维空间结构方面有明显的保守性,.折叠超家族的很多核苷酸结合蛋白可识别不同形式的核苷酸础⒌チ碊、,惺苟嘀止δ埽缱B技せ罨蛞种啤修复、翻译抑制等删。由此推测的结构域可能具有崽ǖ幕钚浴K栽诿挥泻怂崦傅拇呋位点的情况下蛋白与核苷酸的结合