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中文摘要冠状病毒膜蛋白的研究及扇诺某醪接τ本课题包括的研究内容有:首先利用两对引物从—基因的直鹂寺∪胝婧吮泶镌靥錺蚿吮泶镌靥年月至年拢谌喔龉液偷厍⒌难现氐募毙院粑雷酆征,怯梢恢中滦偷墓谧床《珻璴起的。该病毒全基因组长个核营酸,在复制时不经过锥巍谧床《竞怂嵝蛄忻飨圆煌谒幸阎5墓谧床《荆赡苁粲诠状病毒科的第四型。其编码的蛋白质推测有种,但对感染患病起重要作用的可能是止丶鞍祝篍蛋白、鞍住蛋白、鞍住⒍嗑勖负蛋白水解酶。目前对于—饕5鞍椎难芯恐饕<杏贜蛋白、鞍祝云銶蛋白却较少涉及。扩增出。真核表达鞍撞⒀芯科湎赴ㄎ弧擞盏糋融合蛋白,构建扇胖刈樵靥錺/.,。在第一阶段的工作中,,用猙方法检测到其成功表达;┑闹刈榈鞍住Mü秸叩谋冉希⑾终饬街址绞奖泶锏牡鞍状笮〈在差异。同时诱导表达也为得到鞍卓固遄隽俗急福焕妹庖哂ü饧觳獾姆椒ǔ步确定了鞍锥ㄎ挥谙赴手小扇且恢钟伤碦辗⒌男蛄刑匾煨宰B己蠡虺默,由两个阶段组成:在启动阶段,较长的鼶切割,降解成~个碱基的小干扰;在效应阶段,肽谇泻怂崦附岷闲纬沙聊合体,后者与靶结合,导致靶被切割,从而引起目的基因的表达抑制。由于技术具有高效、专一、用量少、毒性小的特点,因此近年来已被广泛地应中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文
槎樘眯吞枚樯锒樗芏樾筒橹饔ぶ骼俭误宪用于生物学研究的诸多领域。本实验在第二阶段利用技术探讨了在抗冠状病毒蜃B贾械淖饔谩我们将特异的靶向基因的两对与共转入细胞株,在暗鞍姿焦鄄靤母扇判вΑNL剿鱎俅灿τ玫目能性提供了依据。以不同剂量的H鞠赴嘌∈焙筇崛∠赴躌,通过法测定蛩剑ü庠靥逯刈镸蛋白干扰后的观察,结果显示所设计的两对均有抑制作用,并且作用随着亮康脑黾佣銮俊F浣档效率达%以上。同时初步的试验结果表明两对作用还存在强弱之分。上述结果表明,可有效地抑制虻淖B己透粗疲哂泻芮靠筍虻淖饔茫猄闹瘟坪蚆蛋白进一步功能研究提供了依据。关键词:冠状病毒;鞍祝籹
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前言5酵月,全世界完成全基因组个核苷酸组成,具有个开放阅读框,基因组结构与其它冠状病毒相似,但基因序严重的急性呼吸道综合征,轮月,在全球多个国家和地区爆发,短短半年时间内在全球共引起人发病,其中怂劳觥緇死嘟】荡戳艘怀≈卮蟮脑帜选T谌澜绺国医学专家的共同努力下,一种新型的冠状病毒,被发现并锁定为的病原体。由于这是一种全新的病毒,它引起了全世晁的高度关注。目前,.芯恳丫〉昧瞬簧儆幸庖宓某晒O愀鄞笱У腜捌渫隆年帐紫热〉昧送黄菩越埂K谴踊颊叩难局蟹掷牖竦昧艘恢中滦的冠状病毒,并且完成了该病毒的全基因组转录和扩增。随后等也先后在病人的唾液、血浆、粪便等样本中分离鉴定出了一种新型的冠状病毒,进一步证实了等人的结论。年眨幽么驜琢鲅芯克蜃榭蒲е心首先完成了该病的基因组测序【。日,谧酆鲜澜鍪笛槭已芯砍晒的基础上,正式确定这种新型的冠状病毒即为的病原体,《灸浚诓《科,冠状病毒属。与其它冠状病毒一样,属于单股正链《尽疽ど弦簿哂一般冠状病毒的冠状结构特征。实验中发现病毒颗粒周围环绕着像日冕一样的圆环,圆环之上和外壳表面分布着大大小小的蛋白。其全基因组由列与原先发现的冠状病毒的同源性不高。在复制时不经过锥巍:推渌鸵知冠状病毒相比,冠状病毒核酸序列相似性系数是.,氨基酸序列相似性系数是.,它明显不同于所有已知的冠状病毒,可能属于冠状病毒科的第四型【们。其编码的蛋白质推测有种,但是对感染患病起重要作用的可能是关键蛋白:鞍住蛋白、鞍住蛋白、多聚酶和鞍姿饷浮蛋白是小的包膜相关蛋白,在冠状病毒的自我组装过程中起至关重要的作用。鞍资枪状病毒中一种重要的结构蛋白,含有其它冠状病毒鞍字胁淮嬖诘暮俗R菩藕判列。研究推测冠状