文档介绍：PCR技术(九):PCR扩增产物的电泳分析
凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种.
一、琼脂糖凝胶电泳:
琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、, ~65℃,溶解后在 37℃下维持液体状态约数小时,主要用于DNA片段的回收,质粒与外源性DNA的快速连接等.
(一)凝胶浓度
凝胶浓度的选择依DNA分子的大小而定.
琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围
琼脂糖浓度(%)
线型DNA分子的分离范围(Kb)

5~60

1~20

~10

~7

~6

~3

~2
(二)电泳缓冲液
核酸电泳缓冲液有三种,即Tris-硼酸(TBE)、Tris-乙酸(TAE)和Tris-磷酸(TPE).TBE 与TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE在DNA片段回收时含磷酸盐浓度高,容易使 ,但价格较便宜,,从而抑制DNA酶的活性,防止PCR扩增产物降解.
10XTBE缓冲液的配制
Tris硷,108克
EDTA,
硼酸,55克
H2O至,1000ul
(~)
(20倍稀释.
(三)核酸电泳的指示剂与染色剂
:,%、1%、%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、、,它在 1%%琼脂糖中电泳时,.
指示剂一般与蔗糖、①增加样品密度,使其比重增加,以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指示带,可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色,使加样操作更方便.
染色剂:核酸电泳后,需经染色后才能显现出带型,最常用的是溴化乙锭染色法,其次是银染色.
溴化乙锭(ethidium bromide,EB)是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间,在紫外线激发下, ,有时亦可在电泳后,将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10~,肉眼可见核酸电泳带,其DNA量一般>5ng,当溴化乙锭太多,凝胶染色过深,核酸电泳带看不清时,可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察.
银染色:银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛使Ag+还原成银颗粒,. ,DNA不宜回收.
(四)电泳
:
电泳装置主要有电泳仪,电泳槽及灌胶模具等.