文档介绍：番茄β-actin基因的PCR扩增
引物设计:
从番茄β-actin基因(1291bp)(U60482)的序列中,设计一对特异性引物,产物长度为827bp,序列如下:
Tom52F: 5- TATGT-3
Tom52R: 5- -3
Tm:55℃
PCR反应体系:
DNA模板 1μl
10×PCR Buffer ×13= dNTP() 2μl×13=26
Tom52F(10μmol/L) 1μl×13=13
Tom52R(10μmol/L) 1μl×13=13
rTaq(5U/μl) ×13= 13=
总体积 25 μl
PCR反应条件:
94℃ 5min
94℃ 30sec
55℃ 30sec 30Cycle
72℃ 1min
72℃ 5min
4℃∞
反应结束后,PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测。
DNA琼脂糖凝胶电泳
5×TBE缓冲液稀释10倍,×TBE工作液待用
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称1g琼脂糖粉,置于200ml锥形瓶,加100ml ×TBE稀释缓冲液
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用微波炉(或电炉)加热至琼脂糖全部熔化,稍凉后加入5μl EB或其替代物
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透用明胶带将有机玻璃胶槽两端封闭(注意不能留有缝隙)
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将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子
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将冷却至60℃左右的胶液缓缓倒入胶槽中(注意不要产生气泡),胶的厚度约4~6mm
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待胶完全凝固后拨出梳子(注意不要损伤梳底部的凝胶),撕掉两端的胶布
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将胶槽置入电泳槽中,×TBE至液面恰好没过胶板上表
面
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用微量移液器取10μl DN