文档介绍：浙江大学医学院
硕士学位论文
细菌革兰双检荧光定量PCR技术的建立及临床应用
姓名:吴亦栋
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:尚世强
20081001
细菌革兰双检荧光定量际醯慕⒓傲俅灿τ中文摘要浙江大学医学院硕士研究生导师儿科学吴亦栋主任医师第一部分细菌革兰双检荧光定量际醯慕尚世强败血症是一种严重的细菌性感染疾病,在新生儿中具有较高的死亡率,发病隐匿,临床症状无特异性。因此,寻找一种快速、准确的败血症早期诊断方法,对指导临床治疗、降低患儿死亡率、改善预后,具有十分重要的意义。目前,细菌培养是作为“金标准”在诊断临床细菌性病原微生物标本,然而该方法缺乏快速和敏感性。在本研究中,我们分析细菌基因序列,在其保守区设计通用引物和革兰阴、阳性菌分型探针,建立了细菌革兰双检荧光定量新方法,并对临床的相关标本进行了检测。本研究分二部分:第一部分,细菌革兰双检荧光定量际醯慕ⅲ坏诙糠郑妇锢妓ḿ煊ü舛縋技术临分析临床常见菌基因序列,在高度保守区自行设计通用引物和革兰阳性和阴性分型探针,建立细菌革兰阴、阳性菌双通道荧光定量觳馓逑担选取临床较常见的株临床分离株晡8锢佳粜跃晡8锢家跣跃进行细菌革兰双检荧光定量椒ḿ觳猓云兰鄹梅椒ㄌ秸氲奶匾煨裕灰越鸹色葡萄球菌和大肠埃希菌分别代表革兰阳性和阴性菌进行浓度梯度稀释,稀释品床应用。方法:浙江大学硕士学位论文摘要
第二部分细菌革兰双检荧光定量际趿俅灿τ进行该方法的检测以评价细菌革兰双检荧光定量拿舾卸群拖咝怨叵怠结果:细菌革兰双检荧光定量哂薪虾玫拿舾行院吞匾煨裕畹湍芗觳獾个金黄色葡萄球菌,而大肠杆菌可以检测低到鱿妇炅俅才嘌掷胫杲行该方法检测:株革、,株革兰阴性菌株通过革兰阴性探针。探针觳饩Q粜裕粗为阴性,符合率ァ>尴赴《尽《尽⒁腋尾《荆滦鸵蚓鞍咨珠茵,人基因组翱瞻锥哉站R跣浴建立了用通用引物和分型双荧光探针的细菌革兰双检荧光定量椒āF检测快速、准确,具有较大的临床推广应用和临床指导用药价值。用建立的细菌革兰双检荧光定量椒ǘ俅惨伤莆0苎V⒌幕级血标本和菽庹镂;阅阅ぱ椎哪约挂罕瓯荆懈梅椒ǖ募觳猓苯行细菌培养对照实验,检测结果进行统计学分析。1瓯局校妇锢妓ḿ煊ü舛縋共检出例阳性标本,其中革兰阳性菌例,革兰阴性菌例,阳性率为/谎E嘌检出例阳性,阳性率为/粜月是罢吒哂诤笳撸钜煊型臣份脑脊液标本中,细菌革兰双检荧光定量布斐菅粜裕其中革兰阳性菌为份,革兰阴性菌为荩粜月饰%:方法:
ü定量募觳饷舾卸任ィ匾煨晕ィ嫉侵甘.,检测符合率为.%,.。结论:建立的细菌革兰双检荧光定量际跣路椒ㄓ糜诹俅脖瓯包括血、脑脊液的检测,具有快速,特异、敏感的特点,可为临床早期、准确诊断败血症和化脑等细菌性感染疾病提供新方法。关键词:幌妇锢挤中停挥ü舛縋;败血症;化脓性脑膜炎浙江大学硕士学位论文摘要
乃—猵酡騦·籶····,瓵琾猻——
·.甒,珽,琭,甤琤&—··.浙江大学硕士学位论文摘要·甌—
.%籺.%衪谢/甇....%.%,.,⑽;;浙江大学硕士学位论文摘要’
学位论文作者签名:黝~学位论文作者签名爱∽『露┤学位论文版权使用授权书或撰写过的研究成果,也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书逝鎏盘堂送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权逝鎏盘堂可以究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表有权保留并向国家有关部门或机构将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。签字日期:加∥留年本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文作者完全了解C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签名:签字日期:
致谢首先感谢我的导师尚世强主任,感谢他在科研上对我的指导和启发,感谢他在学习、工作、生活上的关怀鼓励。本文正是在他的悉心指导和亲切关怀下得以顺利完成。我是个半路出家的人,让我走上儿科学道路的正是导师尚世强主任。他严谨求实的治学态度、实事求是的工作作风、开拓创新的科研精神以及温和真诚的生活姿态将使我受益终身,在此谨向尚主任表达我最诚挚的谢意同时,我也要感谢中心实验室全体老师对我的关心、包容和帮助,感谢检验科李建平、曹禾谦老师所给予的细心指点和耐心帮助,感