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文档介绍：PCR技术(二):Taq DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus),能在70~75℃.
(一)酶活性与热稳定性
该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 ~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/(90℃以上) 或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成, 但确有良好的热稳定性,℃、95℃、℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~6min后,仍可保持50%的活性,℃~20sec,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65% DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条件, DNA聚合酶还具有逆转录活性, ~68℃,有Mn2+存在时,其逆转录活性更高.
(二)离子依赖性
aqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+,~,用不同浓度Mg2+进行 PCR反应10min,,此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性,Mg2+过高就抑制酶活性,当Mgcl2浓度在 10mmol/L时可抑制40~50%+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度,因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整,+~ DNA聚合酶的催化活性提高50~60%,其最适浓度为50mmol/L,高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性.
(三)忠实性
TaqDNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,而无3'→5'外切活性,它不具有Klenow酶的3'→5',在PCR反应中如发生某些碱基的错配, ×10-4.
(四)抑制剂
低浓度的尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSD)对Taq (%),十二烷基